[发明专利]抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及乳胶增强免疫比浊法技术，具体涉及一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒。

背景技术

抗环瓜氨酸肽抗体是风湿自身抗体系统的一种，类风湿关节炎(RA)具有高特异性的瓜氨酸相关自身抗体系统包括AKA、APF、AFA、抗CCP抗体，这些抗体对早期RA诊断具有较好的特异性，类风湿关节炎(RA)是一种常见的系统性自身免疫性疾病，以关节滑膜炎症以及对称性、破坏性的关节病变为主要临床特征，其病程长，易反复，给患者造成很大痛苦。该病在我国的发病率约为0.4％，全球为0.5～1.0％，患者发病年龄多在20～50岁，女性多于男性，男女之比为1∶3。

抗环瓜氨酸肽抗体(CCP)是环状聚丝蛋白的多肽片段，是以IgG型为主的抗体，对类风湿性关节炎(RA)具有很好的敏感性和特异性，且抗CCP抗体阳性的RA病人骨破坏较抗CCP抗体阴性者严重。类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾病。在全世界大约有1％的人罹患此病。RA能引起关节的疼痛、僵直及肿胀。在发病2年内即可能出现不可逆的骨关节损伤，并可引起多种并发症，如神经系统疾病、心包炎、淋巴腺炎等。因此，及早诊断RA及给予缓解病情的药物治疗，对控制病情非常重要。1998年，国外，首次报道的抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic cirullinated peptide antibodies，抗CCP抗体)的检测，对RA具有较高的敏感性和特异性，是RA新的血清标志物。

研究表明，在RA患者的血清中可以检测到抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)，其抗原位点是环瓜氨酸多肽(CCP)。该肽段是在肽基精氨酸脱亚胺酶的催化下，由蛋白中的精氨酸转化而成。由于CCP可以通过人工合成，对RA的诊断具有较高的敏感性和特异性，而且抗环瓜氨酸多肽抗体的检测较APF和AKA检测具有一定的优越性，因此抗环瓜氨酸多肽抗体的检测对与RA的诊断具有重要意义。

一、间接免疫荧光法

该法的基本原理是用特异性的抗体与载玻片中的抗原结合后形成抗原抗体复合物，继用荧光抗体与抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的发光情况来确定所检测的抗体。该方法评价：由于结合在抗原抗体复合物上的荧光抗体增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的：

(1)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别；

(2)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也不太适用于标本量较多的实验室；

(3)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难；

(4)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足；

(5)只能进行定性检测，不能进行定量测定。

二、放射免疫分析法

放射免疫分析法是利用同位素标记的与未标记的抗原，同抗体发生竞争性抑制反应，是一种在无须采用生物测定方法的情况下用于检测抗原的实验室测定方法。该法极其敏感而又极其特异，但其却需要具备尖端复杂的设备，且成本也不低。同时，还需要特殊的预防措施，因为其要用到放射性物质。因此，如今放射免疫分析法在很大程度上已经被ELISA所取代。

三、免疫印迹法

免疫印迹是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。其不足之处在于：

(1)只能进行定性和半定量分析，无法得出被检物质具体的量。

(2)操作步骤繁琐，试验用时较长。

(3)检测的灵敏度还有待提高。

四、酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法(ELISA)被广泛应用于检测抗环瓜氨酸多肽抗体，但该方法也存在着下述的不足之处：

酶联免疫法自动化程度不高，且受人为因素影响较大；放射免疫法存在着环境污染问题；而化学发光法灵敏度虽高，但测定线性范围较小且检测成本较高，需要特定化学发光检测仪，这些原因导致其应用范围较小。

乳胶增强免疫比浊法也是测定血清中CCP浓度的常用方法，与其他几种方法相比较，存在操作简单、灵敏度高、线性范围宽、无污染、应用范围广等显著的特点。因此，胶乳免疫比浊法有着极大的研究价值，但是目前市场上的乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒抗干扰能力差、特异性低、试剂稳定性不好、试剂本底太高或检测线性范围窄等问题，有待改进。

发明内容