[发明专利]一种快速分析氨基酸混合物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种使用高效液相色谱法快速分析氨基酸混合物的方法。

背景技术

氨基酸已广泛应用于食品、药品中，经研究发现，有些药物中常含有多种氨基酸，各种氨基酸中有关物质主要是其他氨基酸，目前采用的方法中多为薄层色谱法，定性和定量都比较困难，尤其是其他氨基酸，含量在0.1％左右时，薄层板上看不出杂质斑点。氨基酸比例多少直接影响了制剂的质量，从而影响药物的药效。在色谱分离过程中，色谱柱、柱温、流速、流动相的pH都会影响到色谱分离效果，例如：高柱温、大流速都可能使出峰时间提前，然而传统硅胶色谱柱在高温下工作会加快色谱柱的老化，缩短柱寿命，加大流速则会使系统反压升高，而通过改变梯度则要求在色谱柱、柱温、流速等色谱条件相对固定的条件下进行，因此要能同时使多种氨基酸化合物在比较短的时间内达到快速分离，色谱柱显得非常关键。

酰胺键合硅胶色谱柱在反相条件下，可以有效的保留极性化合物，是一种崭现出比氨基柱更好的稳定性，更好的分离效果，酰胺键合硅胶比氨基键合硅胶具有更低的背景噪音。在现有的检测氨基酸的方法中大多采用氨基键合硅胶柱，存在不能同时实现多种氨基酸的有效分离，色谱柱的使用寿命短、成本高等缺点。

发明内容

针对现有技术不足，本发明的目的是提供一种快速分析氨基酸混合物的方法，为氨基酸的质量控制提供有效的分析手段，并用于检测氨基酸类化合物。

为实现上述目的，本发明提供一种快速分析氨基酸混合物的方法，将待测氨基酸混合物用溶剂稀释成供试品溶液，然后采用高效液相色谱法进行氨基酸混合物的分析，色谱柱采用酰胺键合硅胶柱。

优选的，所述供试品溶液中氨基酸混合物浓度为0.01～1mg/mL。

优选的，所述流动相由无机盐水溶液与色谱纯有机溶剂混合而成，所述无机盐水溶液与所述色谱纯有机溶剂混合的体积比为35:65～40:60。

优选的，所述无机盐水溶液与所述色谱纯有机溶剂混合的体积比为40:60～50:50。

优选的，所述无机盐水溶液的浓度为0.03～0.1mol/L。

优选的，所述无机盐水溶液在制备中加入氨水，再用磷酸调pH值至4.0～4.6；进一步优选的，pH值为4.0±0.5；pH范围以4.0±0.1最佳；现有技术中调节pH在6.0左右，会缩短酰胺柱的使用寿命。

优选的，所述无机盐为磷酸钠盐、磷酸钾盐或磷酸二氢盐；优选的，所述磷酸二氢盐为磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠或磷酸氢二钾。

优选的，所述色谱纯有机溶剂为醇类或腈类；优选的，所述色谱纯有机溶剂为甲醇或乙腈。

使用酰胺柱，用上述流动相进行洗脱，能实现各色谱峰的有效分离、分析灵敏度高、结果准确可靠、方法简便快捷，可用于氨基酸类物质或含氨基酸杂质的药物的分析检测。解决了一般液相分析方法的不足。

优选的，所述高效液相色谱法的检测波长为UV205～400nm；波长为205nm最佳，在此波长下，大多氨基酸类物质均有吸收。

优选的，设置的柱温为20～40℃；进一步优选的，柱温为25℃；

优选的，设置流动相的流速为0.6mL/min～2.5mL/min；进一步优选的流速为0.7mL/min～1.0mL/min。

优选的，一种快速分析氨基酸混合物的方法包括以下步骤：

1)制备磷酸二氢盐水溶液，加入氨水，用水稀释后，再用磷酸调节pH值至4.0～4.5，将缓冲盐溶液作为无机盐水溶液；加入氨水后形成的缓冲盐能够稳定溶液的pH，略呈酸性的pH值有利于提前保留时间，提高分析的效率，同时可以延长酰胺柱的使用寿命。

2)将无机盐水溶液与乙腈按35:65～40:60的体积比混合，制得流动相；优选的，无机盐水溶液与乙腈体积比为40:60，溶解样品所用溶剂为65％乙腈的水溶液(体积比)。而现有技术无机盐溶液浓度高，在实际操作过程中，盐易结晶，对色谱柱和仪器的损伤都较大。

3)将氨基酸混合物用65％乙腈的水溶液稀释成浓度为0.01～1mg/mL的供试品溶液；所用溶剂为65％乙腈的水溶液，有利于消除溶剂峰干扰，同时利于保护色谱柱。

4)取供试品溶液适量，注入高效液相色谱仪中，使用酰胺键合硅胶柱，用流动相进行洗脱，检测波长为UV205～400nm，记录液相色谱图；所采用的酰胺键合硅胶柱比氨基键合硅胶具有更低的背景噪音，有利于保护色谱柱。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

1、同时方便的检出多种氨基酸并能达到良好分离；