[发明专利]一种HIV‑1多表位重组蛋白及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种HIV-1多表位重组蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染所致的获得性免疫缺陷综合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)。自1981年世界报道首例艾滋病(AIDS)病例以来，短短30余年，艾滋病迅速在全球范围内蔓延扩散，成为当今全球最大的健康危机，也是影响我国公众健康的重要公共卫生问题。近年来，艾滋病感染在我国出现新的流行态势，即发病率逐年增加，感染对象覆盖不同人群，性传播比例增多，尤其是男-男同性恋病人上升显著，变异重组病毒在流行分离株中所占比例增多。如何有效防治HIV感染，降低发病率和病死率是我国面临的紧迫任务。疫苗是控制HIV感染的有效手段，虽然在HIV疫苗研发方面取得了重要的进展，一种能够同时诱导体液和细胞免疫的HIV疫苗RV144的临床III期试验表明，该疫苗能够在一定程度上降低HIV的感染从而降低艾滋病的发生，但仍然没有有效的疫苗应用于人群。应用HIV-1疫苗预防和治疗HIV-1感染仍然是HIV研究的重要课题。

一种有效的HIV疫苗应该能诱导针对不同流行株、适用于不同人群，由于我国流行的HIV病毒与其它国家和地区不同，人群MHC限制性不同，在疫苗设计时应该选择针对不同流行株和中国主要HLA亚型的HIV保护性表位，以期诱导有效的体液和细胞免疫应答。重组蛋白疫苗与核酸疫苗及活病毒载体疫苗相比具有更好的安全性，更加适于将来临床应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种HIV-1多表位重组蛋白及其编码基因与应用。

本发明所提供的HIV-1多表位重组蛋白，包含在中国主要HIV-1流行株中高度保守、且为中国主要HLA亚型MHC限制性的12个HIV-1 T细胞表位，将该蛋白命名为HIV-MEP1，具体可为如下(a)或(b)或(c)所述的蛋白质：

(a)由序列表中序列1的第13-164位所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(c)将序列表中序列1的第13-164位所示的氨基酸序列，或序列表中序列1所示的氨基酸序列，经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，得到的且与抗HIV-1相关的由(a)或(b)衍生的蛋白质。

其中，序列1由164个氨基酸组成，第5-10位为6个His标签，第13-164位为HIV-1多表位蛋白。

所述HIV-MEP1蛋白在制备HIV-1疫苗中的应用也属于本发明的保护范围。

活性成分为所述HIV-MEP1蛋白的HIV-1疫苗也属于本发明的保护范围。

根据需要，所述HIV-1疫苗中还含有佐剂，具体如铝佐剂。

所述铝佐剂即可为氢氧化铝佐剂，也可为磷酸铝佐剂。在本发明中，采用的所述铝佐剂具体为2％氢氧化铝(InvivoGen公司，其产品目录号为Vac-alu-250)。

在所述HIV-1疫苗中，所述HIV-MEP1蛋白与所述铝佐剂的质量配比可为25：1。

编码所述HIV-MEP1蛋白的核酸分子也属于本发明的保护范围。

所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA、hnRNA或tRNA等。

在本发明的一个实施例中，所述核酸分子具体为编码所述HIV-MEP1蛋白的基因(名称为HIV-MEG1.E)，所述HIV-MEG1.E基因为如下1)-4)中任一所述的DNA分子：

1)序列表中序列2的第37-495位所示的DNA分子；

2)序列表中序列2的第1-495位所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)所限定的DNA分子杂交且编码所述HIV-MEP1蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)所限定的DNA分子至少具有90％以上同源性且编码所述HIV-MEP1蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

其中，序列2由499个核苷酸组成，第13-30位编码序列1的第5-10位所示的6个His标签蛋白，第37-495位编码序列1的第13-164位所示的HIV-1多表位蛋白。序列2的第1-495位编码序列1所示的蛋白质。