[发明专利]一种复方血栓通制剂指纹图谱的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，尤其涉及一种复方血栓通制剂指纹图谱的检测方法。 

背景技术

中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。以指纹图谱作为中药提取物及其制剂的质量控制方法，已成为国际共识，符合中药特色的指纹图谱控制技术体系是当前中药领域的研究热点之一。 

复方血栓通制剂是由三七、黄芪、丹参和玄参制成的纯中药制剂，具有活血化瘀，益气养阴的功能，对眼底病、心绞痛和糖尿病视网膜病变等具有显著的疗效。复方血栓通制剂包括复方血栓通胶囊、复方血栓通片、复方血栓通软胶囊、复方血栓通颗粒、复方血栓通滴丸。2010年版中国药典中收载了复方血栓通胶囊的标准，该标准中描述了三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测 定方法并规定其含量的总和不得少于9.0mg/粒。三七为复方血栓通胶囊的君药，现有的中国药典标准主要对三七的活性成分进行检测，尚无法对复方血栓通胶囊中的化学成分进行全面、系统的检测。中国专利ZL 200510033778.3公开了一种复方血栓通制剂HPLC指纹图谱的构建方法，虽然可以同时对四味药材中的成分进行检测，但主要针对三七的活性成分，无法检出丹酚酸B等其他三位药材中代表性较强的活性成分。因此，现有技术对三七活性成分的检测研究较为充分，但无法同时检出黄芪、丹参和玄参中代表性较强的活性成分。 

发明内容

本发明的目的在于：提供一种复方血栓通制剂指纹图谱的检测方法，旨在解决现有的检测方法无法同时检测出复方血栓通制剂中的黄芪、丹参和玄参中代表性较强的活性成分的问题。 

本发明的目的是这样实现的： 

一种复方血栓通制剂指纹图谱的检测方法，包括如下步骤： 

A)供试品溶液的制备：称取复方血栓通制剂0.1～10.0g，加入50％～100％体积百分含量的甲醇，超声处理，摇匀，滤过，取滤液，得到供试品溶液； 

B)参照物溶液的制备：分别称取丹酚酸B对照品、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品、哈巴俄苷对照品、肉桂酸对照品、隐丹参酮对照品、丹参酮Ⅰ对照品和丹参酮ⅡA对照品适量，加甲醇制成每1ml各含丹酚酸B 25μg、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷1μg、哈巴俄苷3μg、肉桂酸0.5μg、隐丹参酮1.5μg、丹参酮Ⅰ1.5μg、丹参酮ⅡA 2.5μg的溶液，摇匀，得到参照物溶液； 

C)复方血栓通制剂指纹图谱的检测：分别吸取参照物溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪检测，得到复方血栓通制剂指纹图谱；所述液相色谱仪的检测条件包括：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.1％体积百分含量的磷酸溶液为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为270nm，柱温为18～22℃。 

本发明以甲醇为提取溶剂，采用超声处理的方法对复方血栓通制剂中的黄芪、丹参和玄参活性成分进行提取，不仅对其中的活性成分提取较为完全，且方法较简便。此外，本发明以270nm为检测波长，以乙腈-0.1％的磷酸溶液为流动相，通过梯度洗脱，可以达到基线较平稳，分离度、峰形和柱效较佳，出峰个数较多的效果，实现毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、丹酚酸B、哈巴俄苷、肉桂酸、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA等的陆续出峰。其中，毛 蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷来自黄芪，丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA来自丹参，哈巴俄苷和肉桂酸来自玄参。 

优选地，所述超声处理的功率为250～300W，频率为40～50KHz，时间为0.5～1.5h。更优选地，所述超声处理的功率为300W，频率为45KHz，时间为1h。 

优选地，所述梯度洗脱包括：0～30min时，流动相A 15％→35％，流动相B 85％→65％；30～50min时，流动相A 35％→65％，流动相B65％→35％；50～70min时，流动相A 65％，流动相B 35％。 

优选地，所述步骤C)中，柱温为20℃。 

优选地，所述步骤A)中的甲醇为80％体积百分含量的甲醇。以不同浓度的甲醇为提取溶剂，对供试品的提取有较大的影响，本发明结合本发明提供的色谱检测条件对甲醇浓度进行优化：25％甲醇作为溶剂时，几乎提取不到供试品的脂溶性成分；50％甲醇作为溶剂，提取的水溶性成份较多，而脂溶性成份相对较少；80％甲醇作为溶剂，提取的水溶性成份和脂溶性成份均相对较多；甲醇作为溶剂时，提取的水溶性成份较少，但脂溶性成份最多。因此，优选80％甲醇作为提取溶剂。