[发明专利]一种基于磁性Fe3O4@Au复合纳米材料电化学检测人免疫球蛋白E的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种基于磁性复合纳米材料电化学检测人免疫球蛋白E的方法。

背景技术

人免疫球蛋白E (human immunoglobμLin E, hIg E)，是一类具有σ链的亲同种细胞抗体，是参与过敏性鼻炎、过敏性哮喘和湿疹等发病机制调节的主要抗体，是过敏反应的主要始动因素之一。目前，人血清Ig E水平是体外诊断过敏性疾病的一个重要指标。检测方法主要有放射过敏原吸附试验、CAP过敏原检测法、放射免疫分析法、酶联免疫分析法、荧光免疫分析法等。其中放射免疫分析法有辐射，不安全；其他检测方法操作复杂，灵敏度不高，难以实现早期疾病的诊断与研究，且无法满足快速检测的需求。Kejun Feng, Yan Kang, Jingjin Zhao, at al. Electrochemical immunosensor with aptamer-based enzymatic amplification[J]. Analytical biochemistry. 378(1). 38-42(2008)，报道了在金电极表面自组装巯基乙胺用于固定抗体的方法进行检测hIg E，检测的敏感性和特异性有了很大的提高；需要建立一种快速、灵敏、操作简便的hIg E检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是制备一种粒径为35-45 nm的磁性Fe₃O₄Au复合纳米材料，并利用该复合纳米材料电化学检测hIg E。

为了解决这个技术问题，本发明的技术方案如下（未注明的用量和比例以质量计）：

步骤1：磁性Fe₃O₄纳米材料的制备

1)                  将FeSO₄·7H₂O水溶液和PEG-20000水溶液混合，不断搅拌下滴加一定浓度稀氨水调节溶液pH值为10左右，溶液呈墨绿色；

2)                  30℃持续搅拌下逐滴加入H₂O₂溶液，此时溶液呈黑色；

3)                  将溶液转移至高压反应釜中，于160℃下恒温反应6 h；

4)                  磁分离收集下层沉淀，先后用纯水和无水乙醇磁分离洗涤，然后将其置于70℃下烘干；烘干后研磨即得Fe₃O₄纳米粒子。

步骤2：磁性Fe₃O₄Au复合纳米材料的制备

1)                  将10 mg步骤1制备的Fe₃O₄纳米粒子加入120 mL 50g/L PEG-20000中，并超声分散均匀；

2)                  在搅拌下加入氯金酸溶液，并持续搅拌1-2 h；

3)                  在搅拌下加入盐酸羟胺溶液，并持续搅拌反应1 h；

4)                  磁分离收集下层沉淀，先后用50 g/L PEG-20000水溶液和纯水进行磁分离洗涤，即得Fe₃O₄Au复合纳米材料。

优选氯金酸溶液浓度为1%；盐酸羟胺溶液浓度为80 mmol/L；分散介质为50 g/L PEG-20000水溶液，在该条件下所得磁性Fe₃O₄Au复合纳米材料粒径为35-45 nm，且粒径分布均匀，具有超顺磁性，其饱和磁场强度为54.58 emu/g。

步骤3：hIg E标记Fe₃O₄Au复合纳米材料的制备

1)                  将步骤2制备的Fe₃O₄Au复合纳米材料重悬于纯水中，调节浓度为1 mg/mL；

2)                  在Fe₃O₄Au复合纳米材料溶液中逐滴加入一定比例的hIg E抗体，37℃恒温孵育2 h;

3)                  用BSA封闭1 h，溶液中BSA终浓度为1%；