[发明专利]一种野生黄芪和栽培黄芪的鉴别方法

说明书

技术领域

本发明涉及药材品质鉴别技术，具体属于一种野生黄芪和栽培黄芪的鉴别方法。

背景技术

黄芪，是豆科黄芪属植物膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.或蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao的干燥根。《神农本草经》将其列为上品，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血等功效，现代临床常用于治疗：心气虚损、血脉淤阻之病毒性心肌炎、心功能不全及脾虚湿困之肝炎等疾病。

黄芪为多年生草本植物，传统上一直是野生或者仿野生方式，至少生长4年以上，通常6～8年采收。建国后随着黄芪用量的急剧增长，野生黄芪价格不断攀升，甘肃、内蒙等地探索的育苗移栽2年生蒙古黄芪和山东等地探索的1年生膜荚黄芪栽培技术获得成功，并得到大面积推广。但传统的多年生黄芪却一直受到青睐，且价格远远高于1年或2年生的栽培黄芪，导致在市场中出现了以栽培黄芪冒充野生黄芪的现象。

野生黄芪在外形上与栽培黄芪存在一定区别，有经验者可通过黄芪药材外观形状如长度、直径判断黄芪的生长模式，但黄芪药材粉碎后则难以判断。中国药典中以黄芪甲苷和毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量用于黄芪药材的质量控制，但现有黄酮类和皂苷类质量控制指标均无法准确区分野生和栽培黄芪。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鉴别野生黄芪与栽培黄芪的方法。

本发明通过核磁技术获得黄芪药材的核磁共振氢谱，对蔗糖、α-葡萄糖和β-葡萄糖信号分别进行手动积分，计算蔗糖和葡萄糖的积分面积比值SI，根据比值的范围判断未知黄芪药材的生长模式。具体包括以下步骤：

(1)取干燥的黄芪药材粉末，加入液固比20～50倍量50％的甲醇超声提取10～30分钟；提取液于2000～5000rpm室温离心10～30分钟，上清液浓缩至溶剂尽，得黄芪药材提取物；

(2)所得黄芪药材提取物，加入重水和氘代甲醇的混合溶液800μl，10000～16000rpm离心10～30分钟，取上清液600μl转移到核磁管中进行分析，获得核磁共振氢谱；

(3)将核磁共振氢谱导入谱图处理软件，对蔗糖、α-葡萄糖和β-葡萄糖信号分别进行手动积分，计算黄芪药材中蔗糖与葡萄糖的比值SI；

(4)根据黄芪药材中蔗糖与葡萄糖的比值SI大小，判断是野生黄芪还是栽培黄芪：SI<100为野生黄芪，SI>100为栽培黄芪。

本发明提供的鉴别方法，可为区分栽培与野生黄芪提供一种准确有效的手段。一般普通实验技术人员采用本方法即可准确区分野生和栽培黄芪。

附图说明

图1黄芪药材的核磁共振氢谱

图2野生与栽培黄芪SI比值范围分布图

具体实施方式

下面结合附图和优选实施例对本发明作进一步的详细描述。

实施例1、野生与栽培黄芪SI值的确定

收集来源不同的黄芪样本，野生黄芪66批，栽培黄芪45批，详见表1。

表1不同来源黄芪样品信息

1)样本制备：称取样品粉末200mg置于10mL玻璃离心管中，加入50％甲醇6mL进行超声提取，提取时间25min，以3500rpm的转速室温离心25min，提取液经旋转蒸发仪浓缩至溶剂尽；加入400μl氘代甲醇与400μl重水(含NaH₂PO₄和0.05％TSP，用NaOD调节至pH＝6.0)的混合溶液进行溶解，溶解液以13000rpm转速离心10min，移取600μl上清液于核磁管中，进行核磁测试。

2)谱图采集：样品在25℃下于600MHz NMR仪上测定，测定频率¹H NMR 600.13MHz，扫描范围-5～15ppm，扫描次数64scans，采用noesyppr1d序列，以压残余水峰；TSP为内标；Methnol-d₄进行锁场。

3)谱图预处理：谱图导入MestReNova(version 8.0.1,Mestrelab Research,Santiago de Compostella,Spain)，以TSP定标，手动进行基线和相位校正。

4)SI比值计算：对蔗糖、α-葡萄糖、β-葡萄糖的信号进行手动积分(图1)，得到相应的积分面积值，根据自定义公式，进行SI比值计算：