[发明专利]一种连续低剂量辐射富集肿瘤干细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种连续低剂量辐射富集肿瘤干细胞的方法。

背景技术

肿瘤是一群异质性细胞的集合体，其中存在一群具有较强自我更新能力和致瘤能力的细胞亚群，人们将其定义为肿瘤干细胞(Cancer Stem Cells)。肿瘤干细胞理论认为，在原发肿瘤病灶处存在一定量的肿瘤干细胞，经过手术、化疗和放疗等常规治疗后，虽然能够杀死几乎全部的肿瘤细胞，但是还存留有一定的肿瘤干细胞，由于肿瘤干细胞具有很强的自我更新能力，会在原病灶处重新产生肿瘤，使疾病复发，同时肿瘤干细胞能够在机体内转移，形成转移灶(见Vermeulen,L.,Sprick,M.R.,Kemper,K.,Stassi,G.&Medema,J.P.Cancer stem cells--old concepts,new insights.Cell Death Differ 15,947-958,2008和Clarke,M.F.et al.Cancer stem cells--perspectives on current status and future directions:AACR Workshop on cancer stem cells.Cancer research 66,9339-9344,2006)。因此对肿瘤干细胞的深入研究有助于理解肿瘤的发生、发展及转移的分子机制，对肿瘤的检测及治疗具有重要的临床意义。

肿瘤干细胞在肿瘤中的比例极小，利用现有的分离方法，如利用特定肿瘤细胞表面的特异性抗原分子标记，只能从大量的肿瘤组织或肿瘤细胞系中获取极少量的肿瘤干细胞进行生物学研究，在一些需要样品量较多的实验上，样品获取就更加不易。

关于肿瘤干细胞与辐射之间的关系，2006年，Pajonk,F.及其研究团队发现CD44⁺CD24^-/low细胞对辐射具有抗性，并且乳腺癌细胞在经历连续低剂量处理之后，其中的CD44⁺CD24^-/low细胞比例能够得到提升(见Phillips,T.M.,McBride,W.H.&Pajonk,F.The response of CD24(-/low)/CD44+breast cancer-initiating cells to radiation.Journal of the National Cancer Institute 98,1777-1785,2006)。2012年，Yawei Yuan及其同事的研究也发现自我更新能力强的细胞表现出更强的耐辐射能力(见Xie,G.et al.Mammosphere cells from high-passage MCF7cell line show variable loss of tumorigenicity and radioresistance.Cancer letters 316,53-61,2012)。因此，在现有的研究基础之上，发明人模拟临床放射治疗手段，充分研究肿瘤干细胞富集与连续低剂量辐射之间的关系，旨在发明一种切乎实际的富集肿瘤干细胞的手段，用以改变本研究领域肿瘤干细胞样品稀少的局面。

发明内容

本发明的目的是提供一种切乎实际的富集肿瘤干细胞的方法。

为了达到上述目的，本发明提供一种连续低剂量辐射富集肿瘤干细胞的方法。

所述方法包括培养癌细胞系，经过低剂量辐射处理，培养一段时间后，再次接受低剂量辐射处理，如此重复辐射，共计辐射n次，即可富集细胞系中的肿瘤干细胞，提高肿瘤干细胞比例。n为大于或等于1的整数。

优选地，所述癌细胞系为乳腺癌细胞系。

优选地，所述低剂量辐射处理为通过⁶⁰Co进行低剂量辐射处理。

优选地，所述低剂量为1.5-3Gy。

优选地，所述低剂量为2Gy。

优选地，所述培养一段时间为培养1-2周。

优选地，所述共计辐射n次为共计辐射三次。

可以通过以下至少三种方法鉴定肿瘤干细胞是否得到富集：

鉴定方法一：