[发明专利]桑树休眠芽段的超低温保存及嫁接复活方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物种质资源保护领域，特别是涉及一种桑树休眠芽段的超低温保存及嫁接复活方法。

背景技术

桑树为双子叶，桑科，桑属(Morus alba L.)多年生木本植物(落叶乔木或灌木)。具有极高的经济价值、药用价值和园林观赏价值。桑木木材坚硬，可以用来制造家具、乐器、雕刻等，还可做弓(桑弧)、造纸、制造农业生产工具，如桑杈、车辕等。枯枝可以作为干柴；树皮可以作为药材或造纸；桑叶为养蚕的主要饲料，亦作药用，并可作土农药。桑椹不但可以充饥，还可以酿酒，称桑子酒。桑树树冠宽阔，树叶茂密，秋季叶色变黄，颇为美观，且能抗烟尘及有毒气体，适于城市、工矿区及农村四旁绿化。我国是桑树的重要起源中心之一，桑树遍布全国各地，经长期的自然选择和人工选择，形成了多种多样的桑树种质资源，具有丰富的桑树遗传多样性。我国目前收集保存的桑树种质分属12个桑种，3个变种。桑树在我国栽培范围广泛，东北自哈尔滨以南；西北从内蒙古南部至新疆、青海、甘肃、陕西；南至广东、广西，东至台湾；西至四川、云南；长江中下游各地栽培最多。

桑树种质资源一般进行田间、盆和温室栽培保存。但栽培保存不仅占用耕地，并且栽培管理需耗费人力物力，还面临干旱、洪涝、低温、热害、病虫害等自然灾害的影响而导致种质资源丢失的危险。试管苗组织培养保存因多次继代，耗费人力物力，易引起遗传性状变异或污染的危险。超低温保存被认为是这类植物种质资源目前安全、有效、成本低廉的长期保存重要方法。

现已证明，植物材料经超低温保存后，仍能在适宜的条件下复活,再生出新的植株，并保持其遗传稳定性。它避免了田间保存易受自然灾害影响而导致种质变异或毁灭，以及试管苗组织培养保存中因多次继代引起遗传性状变异或污染的危险。

超低温保存方法已发展了很多种。由于植物的繁殖特性、种属、基因型、抗冻性不同，适宜进行超低温保存的种质外植体材料类型也有所不同。迄今为止，国际上尚未建立起具有普适性的超低温保存方法，这也是超低温保存技术实际应用中的一个主要瓶颈。

发明内容

为了更好地保存桑树种质资源，本发明的目的是提供一种桑树的超低温保存及嫁接复活方法。

为了实现本发明目的，本发明的一种桑树休眠芽段的超低温保存及嫁接复活方法，包括如下步骤：

1)获取休眠枝条；2)剪成休眠芽段；3)干燥；4)密封；5)梯度降温；6)液氮保存；(7)化冻；8)回湿；9)嫁接复活。

其中，步骤1)所述获取休眠枝条，为冬天从桑树上剪取带有健康休眠芽的一年生枝条。具体为：冬天从田间生长的桑树上剪取带有健康休眠芽的一年生新枝条，其上休眠芽处于深度休眠期，没有被打破休眠。

其中，步骤2)所述剪成休眠芽段，为将步骤1)所获休眠枝条的中部条段剪成长4-30cm长的节段，每段带1-3个芽。优选剪成长4-5cm长的节段，每段带2个芽。

其中，步骤3)所述干燥为使休眠芽段含水量降低到质量百分含量20％-40％。处理具体为：将休眠芽段用尼龙网袋装好后进行缓慢干燥3-200小时。

其中，步骤4)所述密封为：将干燥后的休眠芽段用铝箔袋或聚丙烯冷冻管密封。

其中，步骤5)所述梯度降温，为将步骤4)密封好的休眠芽段顺序以以下温度和时长降温：5℃1天，0℃1天，-5℃1天，-10℃1天，-15℃1天，-20℃1天，-30℃2天。

其中，步骤6)所述液氮保存为将步骤5)梯度降温后的休眠芽段投入液氮或液氮蒸汽中保存。

其中，步骤7)所述化冻为室温化冻，具体为室温化冻1-4小时。

其中，步骤8)所述回湿为将化冻后的休眠芽段放在湿润的沙土加蛭石或泥炭加蛭石中回湿24-48小时。

其中，步骤9)所述嫁接复活为：从回湿后的休眠芽段上削下1.5-2.5cm长、带有1个休眠芽的芽片，嫁接到砧木条上；每根砧木条嫁接1-2个休眠芽，嫁接1-2周后在接芽上方1-2厘米处剪去上部砧木。

本发明还提供所述桑树休眠芽段的超低温保存及嫁接复活方法在桑树种质资源保护中的应用。

其中，所述桑树的品种优选“湖桑32号”、“育71-1”或“中桑9703”。