[发明专利]检测敌敌畏的胶体金免疫层析检测卡的制备及其检测方法

说明书

技术领域

属于食品安全检测领域，具体涉及食品中有害残留物的检测方法，特别是检测敌敌畏的胶体金免疫层析检测卡的制备。

背景技术

敌敌畏（英文名O，O-dimethyl-O-2，2-dichlorovinylphosphate）又名DDVP，学名O,O-二甲基-O-(2,2-二氯乙烯基)磷酸酯，有机磷杀虫剂的一种，分子式C4H7Cl2O4P。一种有机磷杀虫剂，工业产品均为无色至浅棕色液体，纯品沸点74℃（在133.322Pa下）挥发性大，室温下在水中溶解度1%，煤油中溶解度2%～3%，能溶于有机溶剂，易水解，遇碱分解更快。毒性大。无色油状液体，有挥发性，用来防治棉蚜等农业害虫，也用来杀死蚊，蝇等。可用乳油配成高浓度药液喷洒在仓库害虫、害螨、密闭3~4天后再通风散气，气温较高时药效更好。药液喷洒在棉仓墙面上熏蒸，可防治水稻褐飞虱、棉红铃虫。毒土或毒糠田间撒施熏蒸，可防治粘虫。药液喷洒，可防治稻纵卷叶虫等隐蔽性害虫。敌敌畏施用后能迅速分解，持效期短，无残留，可在作物收获前很短的时期内施用，以防治刺吸式口器和咀嚼式口器害虫，故适用于苹果、梨、葡萄等果树及蔬菜、蘑菇、茶树、桑树、烟草上，一般收获前禁用期为7天左右。对高梁、玉米易发生药害，瓜类、豆类也较敏感，使用时应注意。中国GB5127-85规定食品中有机磷农药的允许标准0.2mg/kg（蔬菜、水果）。

发明内容

本发明目的在于提供快速检测出食品中敌敌畏的残留。

本发明的技术方案是敌敌畏的检测卡及其检测样品的处理方法。敌敌畏的检测卡是在长条扁平薄壳状的检测卡外壳内设置检测条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔，其特征在于测试条是由支承背板上粘贴四种原件组成：支承背板中部粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端上粘贴吸水纸，另一端粘贴样品垫，吸水纸内端与硝酸纤维素膜搭接，样品垫与硝酸纤维素膜之间则有一段金标垫，由金标垫将样品垫与硝酸纤维素膜连接在一起。金标垫中是含有第二种属蛋白和敌敌畏抗体的混合物，硝酸纤维素膜上横向有2条间隔开的显色印记带，一条是含敌敌畏蛋白质偶联物的检测带，另一条是第二种属动物蛋白的IgG（常用的为抗兔抗体或抗鼠抗体）；测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

样品处理方法是：称取试样2±0.05g于50mL的离心管中，加入10mL超纯水，在1800r/min条件下用高速组织粉碎机打碎（约1min），取粘稠液加50%三氯乙酸2mL和二氯甲烷10mL，在回旋式振荡器上高速振摇30min。然后在4℃5000rpm条件下离心30min，取上清10mL，加二氯甲烷2mL，在回旋加速器上振荡混合20min，再在4℃12000rpm条件下离心30min，上清液即为药物的抽提液。

本发明的优点是能快速检测出样品中含有的敌敌畏，且节省检测成本，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。

附图说明

图1是敌敌畏检测卡外壳及检测试纸条在外壳内的安置图。

图2是敌敌畏检测卡检测试纸条结构示意图。

图3是检测试纸条硝酸纤维素膜上显示印迹带示意图。

具体实施方式

1.标记胶体金的制备

胶体金溶液的制备：先将1g氯金酸（HAuCl₄）粉末溶于100mL超纯水配置成1%的氯金酸溶液；再取1L超纯水于特质电炉上加热，至沸腾后加入10mL1%的柠檬酸三钠水溶液，沸腾后继续加热，5分钟后加10mL1%的氯金酸溶液，再次加热至沸腾，等待颜色变为酒红色后开始计时，10分钟后停止加热，取下后自然冷却、定容至1L，即为胶体金溶液。

抗体标记：确定抗体所需的0.1mol/lK₂CO₃的比例，取100mL胶体金溶液，加入此比例0.1mol/L的K₂CO₃，混匀（约5min），再将敌敌畏和第二种属动物蛋白分别用PBS（0.01mo1/L，pH7.4）溶解稀释至2mg/mL，加入2mL2mg/mL的敌敌畏抗体（或2mL2mg/mL第二种属动物蛋白），混匀（5min），最后加入10%BSA2mL，混匀（5min）。离心三次留沉淀，此三次收集的沉淀即为金标敌敌畏抗体。

胶体金标记部分处理：将敌敌畏抗体稀释后，按一定比例将载体（如玻璃纤维、聚酯膜等）浸透，铺均匀，取出放于37℃恒温烘箱烘制8-12h，干燥后即作为胶体金标记部分。

2.免疫层析专用高分子复合膜制备