[发明专利]一种Cu2S标记的雌激素免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种Cu₂S标记的雌激素免疫传感器的制备方法及应用

一种Cu₂S标记的雌激素免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）裸金电极的预处理，将金电极用0.05 μm氧化铝粉末打磨抛光以去除表面的杂质，然后用超纯水进行冲洗；以0.1 mol/L的H₂SO₄作为底液，用循环伏安法进行预处理；

（2）将处理后的金电极浸泡在用乙醇溶解的5 ~ 15 mmol/L的巯基乙酸当中，避光浸泡12 h，利用金-硫键使巯基乙酸固定在金电极表面；

（3）取3 μL含0.1 ~ 0.4 mol/L的EDC与0.1 mol/L的NHS滴加到电极上用于活化羧基，在室温下晾干；

（4）将4 μL，50 ~ 200 ng/mL 雌激素抗体滴到电极上，置于4 ℃保存晾干；

（5）滴涂2 μL、质量分数为0.5 ~ 2.0 %的BSA溶液于电极上，置于4 ℃冰箱保存、晾干；

（6）用超纯水进行清洗，晾干后，将6 μL雌激素混合溶液滴涂于电极表面，使其竞争结合电极表面的抗体，4 ℃保存晾干，用超纯水进行清洗，晾干，即制得雌激素免疫传感器；

所述雌激素混合溶液是由等体积的Cu₂S-BSA-雌激素标记物溶液分别与不同浓度的雌激素溶液混合制得；所述不同浓度的雌激素溶液的浓度为10 pg/mL ~ 10 ng/mL。

2.如权利要求1所述的一种Cu₂S标记的雌激素免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述Cu₂S-BSA-雌激素标记物溶液，制备步骤如下： 

（1）制备Cu₂S纳米材料

将3 ~ 4片、1 cm²的高纯铜片用细砂纸打磨干净，先用超纯水进行冲洗，再用无水乙醇超声清洗，最后用超纯水超声除去残留的乙醇，分别加入600 ~ 1000 μL 0.16 mol/L的硫脲、50 ~ 150 μL的乙二胺，放置2 ~ 4天，铜片表面形成一层Cu₂S纳米材料，超声，将其从铜片上分离，分别用无水乙醇和超纯水清洗数次，置于30 ℃的真空干燥箱中干燥，制得Cu₂S纳米材料；

（2）制备Cu₂S-BSA-雌激素标记物溶液

称取Cu₂S纳米材料2.0 ~ 3.0 mg于1 mL离心管中，超声分散均匀；加入500 μL 质量分数为1.0% ~ 3.0%的戊二醛溶液，室温下搅拌1~3 h，在7000 rpm、20 ℃下离心3 min，制得处理后的Cu₂S纳米材料；将处理后的Cu₂S纳米材料分散在0.5 mL、pH=7.4的PBS中，加入3 ~ 5 μg的雌激素-BSA偶联物，4 ℃下孵化12 h，制得Cu₂S标记的雌激素-BSA孵化物，即Cu₂S-BSA-雌激素标记物溶液，通过离心分离未结合上的雌激素-BSA偶联物后，将其分散在1mL、 质量分数为0.1 ~ 0.3 % BSA的PBS中，置于4℃冰箱备用。

3.如权利要求1所述的一种Cu₂S标记的雌激素免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述的制备方法制备的免疫传感器用于雌激素的检测，检测步骤如下：

（1）使用电化学工作站对三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL、pH 6.0 ~ 7.0的PBS缓冲溶液中进行测试；

（2）用方波伏安法对分析物进行检测，扫描电压范围从-0.3 ~ 0.6 V，电势跃阶为5 mV，频率25 Hz，振幅25 mV；

（3）Cu₂S标记物发生氧化还原反应在0.17 V附近产生信号，根据所得电流强度与雌激素之间的线性关系，绘制工作曲线。

4.根据权利要求1 ~ 3所述的雌激素，其特征在于，所述雌激素选自以下之一：雌二醇、雌三醇、己烯雌酚、双酚A、炔诺酮、炔雌醇、左炔诺孕酮。