[发明专利]一种鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，具体涉及一种鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的检测方法。

背景技术

线粒体是人体细胞中最重要的细胞器，是细胞的“动力工厂”。对受损鼻咽部粘膜细胞线粒体的检测包括对线粒体渗透转换孔(mitochon2dria permeability transition pore , MPTP)的检测、膜磷脂的检测、膜电位的检测、2mtDNA损伤检测、细胞内钙离子浓度检测等。此类检测操作十分复杂，需要精密的仪器设备，一般实验室很难完成，使鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤检测受到极大限制。在如上高难度检测之前，使用一种操作简单、成本低廉的方法，对鼻咽部粘膜细胞线粒体是否损伤进行初步筛查，会对鼻咽部粘膜细胞线粒体是否损伤起到启示作用，对是否需要进一步进行如上高难度检测起到指示作用。因此，研究发明一种鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤检测技术具有很重要的意义。

发明内容

为了解决现有技术中检测鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的方法中操作复杂、设备昂贵、难以实施的问题，本发明提供了一种检测鼻咽部渗液细胞游离亚铁原卟啉、进而了解鼻咽部粘膜细胞线粒体有否损伤的检测方法，本发明提供的方法简单易行，成本低廉，可快速地筛查鼻咽部粘膜细胞线粒体有否损伤。

本发明提供的鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤的检测方法，包括以下检测步骤：

1)取鼻咽部渗液0.5-1 ml；

2）把鼻咽部渗液置于预装有缓冲液的取样瓶中，混匀；样本瓶内预装有醋酸缓冲液，缓冲液的量为2ml，混匀，得样本液；优选的，醋酸缓冲液PH值为4.5；

3）在样本瓶内顺序加入试剂A 1ml，试剂B 1ml；混匀，2分钟内观察颜色变化，与比色板比对检测结果；

所述试剂A为二（4.二甲氨基苯基）甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液；优选的，二（4.二甲氨基苯基）甲烷溶液浓度为0.002mol/L；

所述试剂B为过氧化氢溶液；优选的，过氧化氢溶液为1.5%。

显蓝色或深蓝色，可判定样本中含有游离亚铁原卟啉，线粒体有损伤。

在某些因素的作用下，鼻咽部粘膜细胞稳态失调，出现能量代谢重编程。鼻咽部粘膜细胞代谢出现瓦博格氏效应，导致细胞内低氧和还原态微环境，激活氧感受器和缺氧信号传导通路，促使缺氧特异性转录因子-低氧诱导因子和第二信使-活性氧族活性增高，改变细胞色素等细胞蛋白（HP）的极性量值，使位居蛋白疏水核中的细胞游离亚铁原卟啉（Cells Free Ferrous Protoporphyrin ）析出。细胞游离亚铁原卟啉催生多种自由基，引起细胞膜脂质、脂蛋白、细胞骨架、DNA等的氧化损伤，可使线粒体出现线粒体单价电子渗漏（univalent leak）；胞内Ca2+超载，触发线粒体摄取Ca2+并使Ca2+在线粒体内积聚；抑制线粒体内脱氢酶的功能；以上改变可使线粒体肿胀、嵴断裂崩解、钙盐沉积、外膜破裂和基质外溢。细胞游离亚铁原卟啉析出量与鼻咽部粘膜细胞线粒体损伤程度呈正相关。细胞游离亚铁原卟啉析出后可在鼻咽部渗液中测及。作为筛查手段，测定鼻咽部渗液中细胞游离亚铁原卟啉含量，即可提示鼻咽部粘膜细胞线粒体是否损伤。

本发明提供的检测方法，简单实用，成本低廉，可快速的筛查出鼻咽部粘膜细胞中不含游离亚铁原卟啉的样本、含游离亚铁原卟啉的的样本和可能含有游离亚铁原卟啉的的样本，进而了解鼻咽部粘膜细胞线粒体有否损伤，为进一步检查做准备；本发明可检测出的最低游离亚铁原卟啉的浓度可达5ng/ml，灵敏度高。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的说明。

实施例1

按以下方法检测样本：

1）取鼻咽部渗液0.5-1 ml；

2）把鼻咽部渗液置于预装有缓冲液的取样瓶中，混匀；样本瓶内预装有PH值为4.5醋酸缓冲液，缓冲液的量为2ml，混匀，得样本液；

3）在样本瓶内顺序加入试剂A 1ml，试剂B 1ml；混匀，2分钟内观察颜色变化，与比色板比对检测结果；

所述试剂A为浓度为0.002mol/L二（4.二甲氨基苯基）甲烷，用甲醇溶解后配制成溶液；

所述试剂B为1.5%过氧化氢溶液。

【判定标准】

样本瓶内液体不显色或显微蓝色   （一）  阴性     

         蓝色        （+）  阳性           

         深蓝色      （++） 强阳性    

实验资料：