[发明专利]一种银杏叶提取物中萜类内酯的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物检测方法，具体涉及中药提取物的检测方法，尤其涉及一种检测银杏叶提取物中萜类内酯的检测方法。

背景技术

银杏叶为银杏科银杏属植物的叶子，主要化学成分为黄酮类和萜类内酯化合物，具有重要的药用价值和市场价值，因此，市场上已开发了许多银杏叶系列产品。随着社会的进步和经济的发展，银杏叶萜类内酯的重要性越来越受人们的关注。银杏叶萜类内酯是仅在银杏叶中发现的一类具有特殊结构及显著药理活性的重要成分，迄今尚未发现存在于其他任何植物中，更重要的是它们具有独特的药理作用和治疗价值，常见的银杏叶萜类内酯为银杏内酯A、B、C，白果内酯B，均为强血小板活化因子(platelet-activating factor,PAF)受体拮抗剂，具有很好的药用价值，它们独特的药理作用和治疗价值已引起世界范围制药工业的极大兴趣。随着对银杏叶内酯的深度开发研究，准确、方便、快捷的内酯检测方法有着关键性的作用。

蒸发光散射检测器(ELSD)的检测方法消除了常见于传统HPLC检测方法中的难点，它不同于紫外(UV)和荧光(FLD)检测器，ELSD的响应不依赖与样品的光学特性，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测，不受其官能团的影响。ELSD的响应值与样品的质量成正比，因而能用于测定样品的纯度或者检测未知物。蒸发光散射检测器灵敏度比示差折光检测器高，对温度变化不敏感，基线稳定，适合与梯度洗脱液相色谱联用。《中国药典》2010年版中对银杏叶萜类内酯含量的测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以正丙醇-四氢呋喃-水(1:15:84)为流动相；用蒸发光散射检测器检测。理论板数按白果内酯峰计算应不低于2500。但是每个样品的检测时间长达45min，因此，不能满足银杏叶内酯快速的测定，需要进一步改进检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述不足之处，研究设计快速、准确检测银杏叶萜类内酯的方法，缩短试验周期，提高检测效率。本发明提供了一种银杏叶萜类内酯的检测方法，本发明的技术方案是：以银杏叶提取物为原料，经乙酸乙酯磁力搅拌提取后得到银杏叶萜类内酯组合物溶液，旋蒸浓缩至干，采用甲醇溶解并超声处理，作为检测样品，进行高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测，以外标两点法定量，色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈与水作为流动相，流动相流速为0.1～2.0mL/min，梯度洗脱，柱温箱温度20℃～50℃，蒸发光散射检测器检测(漂移管温度为60℃～110℃，载气压力为1.0～5.0bar，气体流速0.5L/min～3.5L/min)。

具体的，本发明方法包括以下步骤：

(1)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇或乙腈为有机相，纯化水为水相，梯度洗脱；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度为60℃～110℃，载气压力为1.0～5.0bar，气体流速0.5L/min～3.5L/min)。理论板数按白果内酯峰计算应不低于3500；

(2)对照品溶液的制备：分别精密称取白果内酯对照品、银杏内酯A对照品、银杏内酯B对照品和银杏内酯C对照品适量，加甲醇制成每1mL各含2mg、1mg、1mg、1mg的混合溶液，作为对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：取银杏叶提取物0.15g，精密称定，用乙酸乙酯40℃恒温提取3次(分别用30mL、20mL、10mL)，同时磁力搅拌器搅拌，每次10min，合并3次提取液，旋转蒸发仪回收乙酸乙酯至干，残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以0.45μm滤膜过滤，取续滤液即得；

(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液5μL、10μL，供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定，外标两点法对数方程分别计算白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量，各内酯总量即为银杏内酯含量。

本发明方法所述色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶。

所述蒸发光散射检测器的漂移管温度为60℃～110℃，载气压力为1.0～5.0bar，气体流速0.5L/min～3.5L/min。

所述流动相条件：流动相为有机相/水相，二者体积比为20：80～70：30；有机相为色谱级甲醇或乙腈或它们的混合溶液，所述混合溶液中甲醇与乙腈的体积比为10：90～80：20，水相为纯化水。

柱温箱温度20℃～50℃。

流动相流速0.1～2.0mL/min。

梯度洗脱程序：