[发明专利]来自冬虫夏草的丝氨酸蛋白酶、编码基因及其应用

权利要求书

1.一种来自冬虫夏草的丝氨酸蛋白酶，其特征在于所述丝氨酸蛋白酶氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.如权利要求1所述的丝氨酸蛋白酶在生物催化酪素制备酪氨酸中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为：将含丝氨酸蛋白酶基因的重组工程菌经诱导培养获得的湿菌体用pH8.0磷酸盐缓冲液悬浮，超声破碎后，取破碎混合液离心，取上清液作为催化剂，以10.00mg/mL酪素溶液为底物，40℃下水浴反应，反应结束后，将反应液离心，取上清液即获得含酪氨酸的混合液；所述10.00mg/mL酪素溶液按如下步骤制备：取1.000g酪素用0.5mol/L的氢氧化钠水溶液润湿，加入pH值为8.0的PBS缓冲液，在沸水浴中边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，转入100ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度；所述氢氧化钠水溶液的体积用量以酪素质量计为5ml/g。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述底物的用量以酪素质量计，所述酪素的初始浓度为5mg/mL，所述催化剂的体积用量以破碎前湿菌体的质量计，终浓度为20g/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述催化剂按如下方法制备：将含丝氨酸蛋白酶的重组工程菌接种于含终浓度50μg/ml的Kan抗性的LB液体培养基中，37℃、250r/min培养过夜，取培养物，以体积浓度2％接种量转接于含有50μg/ml Kan抗性的LB液体培养基中，37℃、250r/min培养至菌体浓度OD600为0.6～0.8，向培养物中加入终浓度0.05mmol/L的IPTG诱导培养8h，收集湿菌体，将湿菌体在功率40％、破1s停1s条件下超声破碎，取破碎混合液即为催化剂。

6.一种编码权利要求1所述丝氨酸蛋白酶的基因。

7.如权利要求6所述的编码基因，其特征在于所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

8.如权利要求6或7所述的编码基因在构建能够生物催化酪素制备酪氨酸的基因工程菌中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于所述的应用为：构建含有所述丝氨酸蛋白酶基因的重组载体，将所述重组载体转化至大肠杆菌中，获得的重组基因工程菌进行诱导培养，培养液分离纯化获得含有丝氨酸蛋白酶基因的菌体细胞。