[发明专利]禽用高表达脂肪酶枯草芽孢杆菌微生态制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于兽药制剂领域，尤其是一种促进禽生长及肠道疾病预防的高表达脂肪酶枯草芽孢杆菌微生态制剂及其制备方法。 

背景技术

目前我国禽类养殖业已广泛使用高营养饲料进行喂养，尤其是在禽类饲养后期会在饲料中加入油脂用于增肥。动物本身依靠分泌胆汁消化脂肪，由于禽类饲养后期饲料中添加油脂量过大，动物自身消化能力不能满足消化脂肪的需要，会出现饲料利用率低，消化不良，肠炎拉稀等现象，进而造成大面积肠道疾病的发作，给养殖业带来巨大的损失。目前解决这一问题的方法主要有两种：(1)禽类发生肠炎拉稀后，在治疗疾病时，同时服用几种抗生素，短时间内禽类死亡率虽然降低，但易造成肠道中微生物菌群失衡，停药后很快出现反弹，禽类采食量和体重增速明显下降，甚至体重出现负增长。此种方法无法从根本上解决问题，反而会经常适得其反。(2)添加诸如酵母菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌等益生菌，提高禽类肠道内营养物质的消化吸收能力。此种方法固然可以起到一定的效果，但是由于此类菌株胞外分泌的生物酶活低，动物每日摄入饲料中营养物质过高，达不到有效分解吸收，因此很难达到满意的效果。 

寻找胞外高表达脂肪酶的益生菌，在禽类肠道内利用其高酶活性将脂肪降解为易于吸收的小分子脂肪酸、甘油。提高饲料的生物利用度，同时预防由于长期喂养饲料造成的消化不良、拉稀、肠炎等疾病具有重要的现实意义。 

发明内容

本发明克服现有技术的不足，提供了一种促进禽生长及肠道疾病预防的高表达脂肪酶枯草芽孢杆菌微生态制剂。 

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种禽用高表达脂肪酶枯草芽孢杆菌微生态制剂，其特征在于，由以下重量份数的原料制备而成：聚乙二醇400：8-15份；羧甲基纤维素钠：1-10份；瓜儿胶：1-5份；水：70-100份；枯草芽孢杆菌在上述溶液中的浓度为10^6-12/ml。 

优选的，由以下重量份数的原料制备而成：聚乙二醇400：10份；羧甲基纤维素钠：5份；瓜尔胶：1份；水：80份；枯草芽孢杆菌在上述溶液中的浓度为10¹⁰/ml。 

进一步，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌BH1205。 

本发明的另一目的在于提供一种枯草芽孢杆菌微生态制剂的制备方法，包括如下步骤：(1)将聚乙二醇400加热溶于水，混合均匀；(2)加入提前以5倍量水泡制过夜的羧甲基纤维素钠，混合均匀；(3)加入瓜儿胶混合均匀；(4)向溶液中加入枯草芽孢杆菌BH1205，制成菌悬液；(5)包装即得产品。 

本发明具有的优点和积极效果是：本发明所使用的枯草芽孢杆菌BH1205为枯草芽孢杆菌中筛选的胞外高表达脂肪酶菌株。其发酵液中胞外脂肪酶活性可高达5.5U/ml，是目前普通芽孢杆菌的200倍以上。可在禽类肠道体内有效降解饲料中的脂肪，使其分解成为易于吸收的脂肪酸和甘油,提高饲料利用率，有效帮助禽类消化吸收饲料中的油脂，大幅度提高禽类生长速度和 肉料比，防止出现过料拉稀等现象。同时作为益生菌在肠道内定居，可有效抑制有害菌群的生长繁殖，保护肠道健康。 

具体实施方式

实施例1一种高表达脂肪酶枯草芽孢杆菌BH1205的筛选： 

改良中性红培养基：10g蛋白胨，5g牛肉膏，5gNaCl，20g花生油，15g琼脂，加蒸馏水至1000ml，调pH为7.2，最后加2ml浓度为1.6％的中性红水溶液。 

(1)、以BH1205-E、coli穿梭质粒pUBC19和pHP13为基础，分别连接强重组体。(2)、用两类载体分别构建了表达lipA基因的四个重组质粒：pUBCPL、pUBCVL、pHPPL、pHPVL。(3)、四个重组质粒转化BH1205，得到转化子BH1205/pHPPL,BH1205/pHPVL,BH1205/pUBCPL,BH1205/pUBCVL。(4)、将转化子均匀涂布于改良中性红培养基上，37℃培养36h。(5)、转化子BH1205/pUBCPL在中性红油脂平板上的菌落红色最明显，表明其脂肪酶表达量最高。 

实施例2：一种禽用高表达脂肪酶的枯草芽孢杆菌微生态制剂制备方法： 

(1)将聚乙二醇400加热溶于水，混合均匀；(2)加入提前以5倍量水泡制过夜的羧甲基纤维素钠，混合均匀；(3)加入瓜儿胶混合均匀；(4)向溶液中加入枯草芽孢杆菌BH1205/pUBCPL，制成菌悬液；(5)包装即得产品。 

试验例1： 

取实施例2所得产品，喂养肉鸡五万、肉鸭两万只和鹅三万只，全程连 续喂养，试验结果如下: