[发明专利]一种通过测定IVF培养液中β-hCG浓度预测胚胎活力的方法

说明书

所属技术领域

本发明涉及辅助生殖医学体外受精-胚胎移植(IVF-ET)领域，尤其是在非侵入性胚胎质量评价及挑选部分。

背景技术

经过三十余年的努力，辅助生殖技术(assistedreproductiontechnique，ART)已经取得了多个重大突破，促排卵治疗、体外受精和胚胎培养技术均获得了较完善的发展。然而胚胎种植率还没有得到足够的改善。为获得高妊娠率采用多个胚胎移植及其带来的多胎妊娠率和妊娠期母婴并发症的高发现象依然普遍存在，严重影响了体外受精-胚胎移植治疗(invitrofertilization-embryotransfer,IVF-ET)的有效率和安全性。因此，在IVF-ET中，如何有效地选择最有活力的胚胎进行移植从而在稳定妊娠率的基础上降低多胎率已成为当今全世界范围ART的热点问题。

近年来随着生物学标记物检测技术的快速发展，如何从胚胎发育过程中寻找其特定的生物标记，从而客观地评价胚胎发育和种植潜能已成为生殖医学领域基础应用研究的重大挑战。人绒毛膜促性腺激素(humanchorionicgonadotropin，hCG)是一种早期胚胎滋养球细胞和胎盘滋养层合体细胞分泌的，由α亚基及特异性β亚基以非共价键结合的糖蛋白激素。1984年FishelSBandEdwardsRG^[11首先采用放射免疫法测定发现人类囊胚培养液中存在微量可测定的β-hCG，其分泌量随囊胚扩张和孵出快速增加，但该方法测定耗时长且有放射污染。2011年Ramu等^[2]报道的酶联免疫测定法灵敏度达到0.100mlU/ml，但需要大量标本同时测定，且测定花费时间约2天，不能满足IVF临床实验室筛选胚胎方法的要求。因此，如何开发客观、精确、快速和简单、方便、低成本的培养液中hCG检测方法已成为当前亟需解决的困难。

参考文献：

1.FishelSB，EdwardsRG，EvansCJ.Humanchorionicgonadotropinsecretedbypreimplantationembryosculturedinvitro.Science.1984；223：816-8.

2.SivakumarRamu，Ph.D，BrianAcacio，M.D.,MarkAdamowicz,etal.Humanchorionicgonadotropinfromday2spentembryoculturemediaanditsrelationshiptoembryodevelopmentFertil&Steril.2011Sep；96(3)：615-617.

附图说明

无

发明内容

为了克服现有的胚胎体外培养液中β-hCG测定方法耗时长、样本需成批非自动化操作、具有放射污染，不能满足IVF临床筛选胚胎技术的要求，本发明提供一种改良的电化学发光免疫法，该方法不仅灵敏度高(0.100mlU/ml)、特异性高(回归系数＝0.989)、自动化测定、无污染、重复性及再现性好，而且每份标本测定时间为20分钟左右。经过大样本的回顾性分析证实胚胎培养液β-hCG水平与胚胎发育及种植潜能呈高度正相关，具备作为胚胎生物标记物应用于临床开展选择性胚胎移植的要求。本发明能帮助预测胚胎活力，前瞻性选择具有种植潜力的胚胎移植、在稳定妊娠率的基础上减少移植胚胎数目降低多胎妊娠。

具体实施方式

在此申请专利的方法包括步骤：提供胚胎体外培养后剩余的培养液标本；新鲜或冻存在-80℃中；采用改良电化学发光法测定所述培养液中β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)水平；基于β-hCG水平预测胚胎发育和种植潜能；选择分泌高水平β-hCG的胚胎进行移植。

1.胚胎培养

①能够使用本发明方法评估的人类胚胎可以通过任何现有已知技术的方法产生。

②在一些实施方案中，胚胎由卵母细胞常规体外受精(IVF)形成的受精卵发育而成。在IVF中，通常将卵母细胞置于精液(浓度为5000-10000条精子/卵细胞)中，使其发生体外受精。受精后16-18小时观察原核情况，将正常受精(双原核)的胚胎置于适用于卵裂期胚胎生长发育的培养液中。受精后第3天观察胚胎情况，再将其转移至适用于囊胚期胚胎生长发育的培养液中。可选择第3天胚胎或囊胚移植到女性子宫腔内。