[发明专利]一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法，属于材料化学技术领域。

背景技术

细胞作为生命活动的基本单元，其中伴随着许多生化反应的发生，采用有效的手段对这些生理过程的监测，对探究生物体基本活动以及疾病预防方面具有积极意义。利用等离子纳米材料在细胞内部的结构变化及其与手性配体偶极之间强烈的耦合，能够使得纳米材料在细胞内部表现出强烈的圆二色性。

发明内容

本发明的目的是提供了一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法，得到了性质稳定，手性信号强烈的纳米金聚集组装体。

本发明的技术方案，一种细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法，步骤为：

（1）纳米金的表面修饰：利用柠檬酸还原法得到的金纳米粒子，将其与巯基修饰的聚乙二醇PEG 5000、聚乙二醇PEG 1000和穿膜肽TAT按一定比例混匀后，室温震荡24h，获得表面修饰的金纳米粒子；

（2）纳米金转染细胞：将步骤（1）获得的表面修饰的金纳米粒子离心重悬于细胞培养液中，并与一定数量的细胞共同培养一段时间后，用胰蛋白酶消化细胞，得到细胞内含有金纳米粒子的细胞悬液；

（3）细胞内纳米金的手性表征：对步骤（3）中得到的细胞悬液进行生物电镜表征和圆二色性表征。

所述细胞内等离子手性纳米聚集体的组装方法，具体步骤如下：

（1）纳米金表面的修饰：取100mL、2nM、20nm的金纳米粒子以8000rpm离心10min，并重悬在10mL 0.01M pH7.4的磷酸盐缓冲液PBS中；按金纳米粒子︰PEG5000︰PEG1000︰TAT为1︰1000︰100︰100的摩尔比同时加入金纳米粒子溶胶中；室温震荡24h后，8000rpm离心10min，沉淀重悬于超纯水中，得到表面修饰的纳米金溶胶；

（2）纳米金转染细胞：将步骤（1）制备的表面修饰的纳米金溶胶重悬于细胞培养液中，使金纳米粒子的终浓度为5nM；将细胞接种于6孔板中，取其中1个孔使其中的细胞数量达到10⁴个，培养24h后去掉培养液，再向每孔加入上述含有纳米金溶胶的细胞培养液1mL，37℃孵育36h后，清除培养液，用PBS反复洗涤，将洗涤后的细胞用0.25%胰蛋白酶消化5min，1000rpm 离心10min，沉淀重悬于100μL PBS中，得到细胞内含有金纳米粒子的细胞悬液；

（3）细胞内纳米金的手性表征：采用生物透射电镜和圆二色谱法对步骤（2）中得到的细胞悬液进行表征。

所述穿膜肽TAT的多肽序列为YGRKKRRQRR RC。

表1  多肽的编号、序列及长度

编号序列(5’-3’)长度TATYGRKKRRQRR RC12

本发明的有益效果：本发明提供了能够稳定高效进入细胞内的纳米金的制备方法，获得了能够在细胞内部特定时间发生聚集，且产生强烈手性信号的纳米金粒子。

附图说明

图1纳米金粒子在细胞中聚集的生物透射电镜图。

图2纳米金粒子在细胞中聚集的紫外-可见光吸收图谱。

图3 纳米金粒子在细胞中聚集的圆二色图谱。

具体实施方式

实施例1

所有的玻璃仪器都用王水浸泡24h，并用双蒸水清洗，晾干备用。实验中使用的水均为18.2 MΩ的Milli-Q 超纯水。本发明所使用的多肽均购自中国上海生工生物工程有限公司。