[发明专利]全真一气汤多糖的提取纯化的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖的提取纯化方法，尤其涉及一种绿全真一气汤多糖的提取纯化的方法；属于中药提取技术领域。 

背景技术

全真一气汤为明清医学大家冯兆张《冯氏锦囊秘录》中的著名方剂。由熟地黄、白术、人参、麦冬、五味子、附子、牛膝组成。临床广泛用于治疗各种老年虚损性疾病，如胃肠疾病，慢性阻塞性肺病、肺癌、等辩证属气血阴阳俱虚免疫功能低下者，疗效显著。现代研究表明，多糖具有调节免疫，降血脂，抗肿瘤，抗炎，抗衰老等生理功能。 

目前有关全真一气汤多糖的提取研究报道很少，本课题组近年对全真一气汤多糖进行了一定程度的探讨，发现其主要的药理作用为增强免疫力，对正常小鼠及环磷酰胺免疫抑制小鼠的非特异性免疫功能有不同程度的增强作用，可提高环磷酰胺抑制的体液免疫功能，具有肠道粘膜免疫调节作用，其主要机理为升高免疫抑制小鼠血清IL-6和TNF-α水平，刺激免疫抑制小鼠机体的细胞因子分泌，从而达到调节免疫功能的作用。 

陈虹在硕士论文中虽然提供了《全真一气汤总多糖的提取与质量控制初步研究》，但是所得的多糖含量不高，提取率也比较低。 

发明内容

针对上述不足，发明目的在于提供一种提取纯化方法简单，多糖含量高的全真一气汤多糖的提取纯化方法。 

为此，本发明提供的技术方案是这样的：该全真一气汤多糖的提取纯化的方法，依次包括下述步骤： 

1)按全真一气汤配方比例称取熟地黄、白术、人参、麦冬、五味子、附子、牛膝，除熟地外，其余药材干燥，粉碎； 

2)将熟地切段，与步骤1)粉碎后的药材混合，用超声提取法提取药材1-3次，每次7-9倍水提取25-35min后粗滤，静置过夜后离心分离，取上清液； 

3)将步骤2)中的上清液浓缩至相对密度为1.15-1.2，用乙醇调至药液乙醇含量为75-85％，静置离心分离，取下层沉淀用乙醇洗涤后于55-65℃真空干燥得粗多糖A； 

4)取步骤3)粗多糖A加水溶解，摇匀，酸调节pH至5-6，加入木瓜蛋白酶,在45-55℃， 酶解4-6h，灭活，离心除去沉淀，取下层液得粗多糖酶解液B； 

5)向步骤4)粗多糖酶解液A中加入其体积1/4-1/6的氯仿-正丁醇溶液，震荡，静置过夜，收集上层水相溶液，得到多糖溶液B； 

6)取步骤5)多糖溶液B，加水配制成浓度为3-5mg/ml的溶液，调节多糖溶液的pH至4.5-5.5，加入大孔树脂在45-55℃水浴下搅拌1-3h，过滤的粗多糖B； 

7)取步骤6)粗多糖B加水制成浓度为4-6mg/mL的溶液，将溶液装入透析袋中，封好两端，放入水中透析，每隔20-28h换一次水，48h后，取出透析袋中的溶液，55-65℃真空干燥即得精多糖。 

进一步的，上述的全真一气汤多糖的提取纯化的方法，步骤1)所述的干燥温度均为60℃。 

进一步的，上述的全真一气汤多糖的提取纯化的方法，步骤2)所述的超声条件为在室温下超2s停2s，功率800w。 

上述的全真一气汤多糖的提取纯化的方法，步骤2)、步骤3)和步骤4)所述的离心条件均为5000rpm×10min。 

进一步的，上述的全真一气汤多糖的提取纯化的方法，步骤3)所述的上清液浓缩是在60℃旋转蒸发至药液相对密度为1.15-1.2。 

进一步的，上述的全真一气汤多糖的提取纯化的方法，步骤4)所述的酸为冰醋酸。 

进一步的，上述的全真一气汤多糖的提取纯化的方法，取步骤2)粗多糖A:水:木瓜蛋白酶的质量比是1：50:1.5。 

进一步的，上述的全真一气汤多糖的提取纯化的方法，步骤4)所述的灭活是沸水浴灭活5min。 

进一步的，上述的全真一气汤多糖的提取纯化的方法，步骤6)所述的大孔树脂是大孔树脂AB-8。 

与现有技术相比，本发明提供的技术方案：操作简单，多糖含量高，纯度高。通过脱蛋白，透析处理后，多糖含量均上升较高。虽然脱蛋白处理本身并没有提高粗多糖中的多糖含量，但是这个步骤对于整个多糖的精制过程是必不可少的。 

全真一气汤具有较显著的临床疗效，对其进行深入的作用机理研究，阐明其科学内涵，具有重要的临床意义。特别是对于其作用的物质基础，有必要进行深入研究。全真一气汤中多种药材含有多糖类成分，而现代研究亦证明，多糖类成分具有多种生理活性，如提高免疫力、抗病毒等。 

具体实施方式