[发明专利]从谷氨酸棒状杆菌菌渣中提取胞壁酸的方法及检测方法

权利要求书

1.一种胞壁酸的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：步骤如下：

1)取待检测样品液，点样于高效薄层硅胶板上，同时，将不同浓度的标准液点样于同一块高效薄层硅胶板；展开剂加入展开缸中进行预平衡，后将高效薄层硅胶板放入展开缸中进行二次展开，取出晾干；

所述展开剂为甲醇-丙酮-乙酸-水-异丙醇混合液，其中，甲醇、丙酮、乙酸、水、异丙醇五者的体积比为4～6：2～4：0.5～1：0.5～1：0.5～2；

2)将质量浓度为1％的茚三酮乙醇溶液喷到高效薄层硅胶板上进行烘烤染色；

3)利用薄层扫描仪进行薄层层析扫描，得到胞壁酸Rf(比移值)和峰面积积分值；同时，计算出标准液质量和峰面积积分值的关系的回归方程，然后根据样品液的峰面积积分值计算出样品液中胞壁酸的质量浓度。

2.根据权利要求1所述的胞壁酸的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述高效薄层硅胶板选用GF254高效薄层硅胶板。

3.根据权利要求1所述的胞壁酸的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述标准液为5种不同浓度的标准液，浓度分别为2.0，3.0，4.0，5.0，6.0mg/ml。

4.根据权利要求1所述的胞壁酸的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述甲醇、丙酮、乙酸、水、异丙醇五者的体积比为5:3:1:1:1。

5.根据权利要求1所述的胞壁酸的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述展开剂预平衡和硅胶板展开过程的温度为25℃，时间20min。

6.根据权利要求1所述的胞壁酸的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述烘烤染色的烘烤温度为110℃，时间5min。

7.根据权利要求1所述的胞壁酸的薄层层析扫描检测方法，其特征在于：所述样品液是通过以下方法制备得到的：

1)取新鲜谷氨酸棒状杆菌菌渣(原料菌渣)，先用质量浓度为0.9％的生理盐水在室温下多次洗涤菌渣，以除去异臭味和易溶物质，过滤，得滤渣；

2)步骤1)所得滤渣，加入原料菌渣质量3～5倍的质量浓度为10％的三氯乙酸溶液，在温度45～60℃下，搅拌15min～1h，过滤，得滤渣；

3)将步骤2)所得滤渣用蒸馏水洗涤1～2次，以除去三氯乙酸，然后依次用滤渣质量2～10倍的甲醇、甲醇-氯仿混合液、氯仿洗涤脱脂，各2次；得脱脂滤渣；

4)向步骤3)所得脱脂滤渣中加入浓度为5～8mol/L的盐酸，按每克原料滤渣加入4～10毫升盐酸，置于水浴中，在温度90～100℃下酸解4～8h；酸解后，得棕黑色的酸解液，将酸解液浓缩蒸干，得胞壁酸粗品；

5)步骤4)所得胞壁酸粗品，用蒸馏水溶解，加入氯仿，剧烈震荡摇晃，静置分液，弃去下层有机相，再加入氯仿萃取1～3次，得上层溶液；

6)将步骤5)所得上层溶液蒸发挥干，用甲醇溶解，加入活性炭混合吸附1～3次，至溶液变为无色透明，即得样品液。

8.一种从谷氨酸棒状杆菌菌渣中提取胞壁酸的方法，其特征在于：步骤如下：

1)取新鲜谷氨酸棒状杆菌菌渣(原料菌渣)，先用质量浓度为0.9％的生理盐水在室温下多次洗涤菌渣，以除去异臭味和易溶物质，过滤，得滤渣；

2)步骤1)所得滤渣，加入原料滤渣质量3～5倍的质量浓度为10％的三氯乙酸溶液，在温度45～60℃下，搅拌15min～1h，过滤，得滤渣；

3)将步骤2)所得滤渣用蒸馏水洗涤1～2次，以除去三氯乙酸，然后依次用原料菌渣质量2～10倍的甲醇、甲醇-氯仿混合液、氯仿洗涤脱脂，各2次；得脱脂滤渣；

4)向步骤3)所得脱脂滤渣中加入浓度为5～8mol/L的盐酸，按每1克原料菌渣加入4～10毫升盐酸，置于水浴中，在温度90～100℃下酸解4～8h；酸解后，得棕黑色的酸解液，将酸解液浓缩蒸干，得胞壁酸粗品；

5)步骤4)所得胞壁酸粗品，用蒸馏水溶解，加入氯仿，剧烈震荡摇晃，静置分液，弃去下层有机相，再加入氯仿萃取1～3次，得上层溶液；

6)将步骤5)所得上层溶液蒸发挥干，用甲醇溶解，加入活性炭混合吸附1～3次，至溶液变为无色透明，即得胞壁酸溶液，浓缩干燥，得胞壁酸。

9.根据权利压球8所述的从谷氨酸棒状杆菌菌渣中提取胞壁酸的方法，其特征在于：所述活性炭选用型号303糖用活性炭。