[发明专利]聚乙二醇化血小板生成素模拟肽同源四聚体及其用途

说明书

本发明涉及一种具有长效作用的聚乙二醇化血小板生成素模拟肽同源四聚体的制备方法及其用途。通过氨基末端为半胱氨酸残基的血小板生成素模拟肽二聚体与聚乙二醇分子两端偶联而成的聚乙二醇化血小板生成素模拟肽同源四聚体，具有长效升高外周血血小板数量的功能，可作为一种血小板减少症的治疗药物，包括特发性血小板减少性紫癜、化疗引起的血小板减少症、肝炎引起的血小板减少综合症及骨髓增生异常综合症等。

技术领域

本发明涉及一种聚乙二醇化血小板生成素模拟肽同源四聚体的制备及用途，属于生物技术及药物领域。

背景技术

血小板减少症是临床上常遇到的疾病，常见于肿瘤放疗、化疗和骨髓移植患者，也见于特发性血小板减少性紫癜(ITP)、肝炎诱发的血小板减少综合征、骨髓增生异常综合征(MDS)及慢性肝病。血小板减少症是一种常见的血液病，肿瘤患者接受化疗和放疗后，骨髓受到不同程度的抑制，造成贫血、粒细胞减少和血小板减少。临床上已有重组的长效和短效EPO和G-CSF治疗贫血和粒细胞减少症，短效的重组IL-11和TPO用于放化疗后血小板减少症，长效的Nplate用于特发性血小板减少紫癜的治疗。

血小板生成素（Thrombopoietin,TPO）是调节血小板生成最主要的细胞因子，它能专一的促进巨核细胞的生长发育和血小板的生成。人内源性TPO由332个氨基酸组成，N端为其受体结合位点，C端为高度糖基化部分（Bartley et al.,Cell 77:1117-1124(1994);Chang et al.,Journal of Biological Chemistry 270:511-514(1995)）。TPO主要在肝脏、骨髓基质细胞及肾脏合成，通过与其受体c-Mpl结合，激活信号通路，促进巨核细胞增殖分化从而介导血小板生成(Blood 82:1395-1401，1993；Blood 87:2162-2170，1996)。

血小板生成素模拟肽（Thrombopoietin Mimetic Peptide，TMP）是与TPO具有相似功能但不具同源结构的多肽物质，由Cwirla等从丝状噬菌体展示肽库中筛选到高活性的TPO模拟肽（AF12505）。该血小板生成素模拟肽为线性肽，其氨基酸组成为Ile-Glu-Gly-Pro-Thr-Leu-Arg-Gln-Trp-Leu-Ala-Ala-Arg-Ala，具有刺激TPO依赖性细胞株Ba/ F3-mpl的增殖功能，EC50为400nmol/L (Science 276:1696-1699，1997)。但该结构的活性肽体内生物学活性偏低，半衰期极短，难以满足作为一种治疗性药物的临床应用的需要。且进一步研究发现，TMP不会像重组TPO一样，在体内诱导产生与人TPO交叉反应的中和抗体(NatureBiotechnology 15:1261-1265，1997)，提示具有优于TPO的临床应用前景。

为克服TMP多肽在体内半衰期过短的缺陷， Amgen公司设计并开发成功了重组TMP-FC融合蛋白，用于临床治疗脾切除和脾未切除慢性免疫性血小板减少性紫癜（ITP）；具有一周皮下给药一次的长效作用，于2008年8月获得美国FDA 批准上市，商品名Nplate。Nplate包含2个相同的单链亚单元,每个单链包含IgG Fc恒定区域和TPO模拟肽，C末端由二硫键链接而成，其中TPO 模拟肽包含2个串联的TMP多肽序列，Fc区域实现体内长效功能（CN1810832A）。

本发明提供了一种衍生于TPO模拟肽AF12505的血小板生成素模拟肽的二聚体，该二聚体通过含氨基末端为半胱氨酸的巯基与双活化的聚乙二醇分子共价偶联成同源四聚体偶联物。

本发明人经研究发现，该聚乙二醇化血小板生成素模拟肽同源四聚体偶联物实现了体内血液半衰期的极大延长，在实验动物体内单次注射给药后显著促进外周血血小板数量增加的功效，可作为一种新型的长效治疗血小板减少症的药物或者药物组合物。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有长效作用的血小板生成素模拟肽的同源四聚体，以及实现该同源四聚体的制备方法，用于作为治疗血小板减少症的药物。