[发明专利]李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条

说明书

技术领域

本发明属于微生物检测领域。具体而言，本发明涉及一种李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条。

背景技术

李斯特菌(Listeriaspp.)是一种短小的革兰氏阳性无芽胞兼性厌氧杆菌，共有单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytohenes)、绵羊李斯特菌(Listeria iuanuii)、英诺克李斯特菌(Listeria innocua)、威尔斯李斯特菌(Listeria welshimeri)、西尔李斯特菌(Listeria seeligeri)、格氏李斯特菌(Listeria grayi)、默氏李斯特菌(Listeria murrayi)七个菌株，其中单核细胞增生李斯特菌是李斯特菌属中致病力最强的细菌，也是唯一对人致病的、典型的胞内寄生菌，可以导致严重的人畜共患传染病，如脑膜炎、败血症、流产和单核细胞增多等症状。1988年，世界卫生组织(World Health Organization，WHO)发表“食源性李斯特菌病劝告书”，指导全世界各国如何预防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成为新的重要的食源性疾病病原菌，WHO将其与E.coliO157、沙门氏菌以及金黄色葡萄球菌并列为20世纪90年代四大食源性致病菌。该菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香肠、加工禽类、生肉、鱼、虾、烟熏鱼、生蔬菜。

目前李斯特菌的检测主要依赖于国标所规定的生化鉴定，其缺点是操作繁琐、检测周期较长，无法适应大量的样品筛查。免疫学检测是近年来出现的最快速、准确、稳定的快速检测手段，但是检测产品全部依赖进口，我国目前尚无拥有完全自主知识产权，且可运用于检测实践的快速检测产品，该专利以李斯特菌为检测靶标，所要求保护的技术涉及李斯特菌快速检测产品。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供一种李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条。

一种李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条，具有衬板，以及在衬板上依次排列的样品垫、金标垫、NC膜和吸收垫，其特征在于：

其中，由保藏号为CGMCCNo.8002的杂交瘤细胞株6D4H7C8B6产生的单克隆抗体作为金标抗体偶联胶体金，由保藏号为CGMCCNo.8765的杂交瘤细胞株1B4E7A6C9产生的单克隆抗体作为检测抗体，金标抗体偶联胶体金后喷涂于金标垫上，检测抗体喷涂于NC膜上形成检测线。

另外，本发明还提供了李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条在检测食品中的李斯特菌中的应用。

发明作用与效果

根据本发明的李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条，由于采用了配对单克隆抗体分别喷涂金标垫和检测线，实验结果对李斯特菌的检测特异性和灵敏性均较高。

附图说明

图1是本发明实施例中单克隆抗体纯度测定的结果；

图2是本发明实施例中李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条的各抗体偶联胶体金的最佳pH的检测结果；

图3是本发明实施例中李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条的各抗体偶联胶体金的最佳结合量的检测结果；

图4是本发明李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条的结构示意图；

图5是本发明李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条的各抗体组合配对结果；

图6是本发明李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条的灵敏度测定结果；

图7是本发明李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条的交叉反应结果；以及

图8是本发明实施例中李斯特菌免疫胶体金快速检测试纸条的模拟带菌实验结果。

保藏信息

1.产生抗单核细胞增生李斯特菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株6D4H7C8B6于2013年07月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，中国，北京市)，保藏号为CGMCCNo.8002。

2.抗单核细胞增生李斯特菌杂交瘤细胞1B4E7A6C9于2014年01月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC，中国，北京市)，保藏号为CGMCCNo.8765。

具体实施方式

本发明人的研究表明，以单核细胞增生性李斯特菌作为免疫原，免疫Balb/c小鼠，分离纯化得到抗李斯特菌单克隆抗体1B4E7A6C9和6D4H7C8B6，其抗体效价可达到1:100000，其能够特异性、高效地与李斯特菌结合，与猪霍乱沙门、鼠伤寒沙门、肠炎沙门、福氏志贺、宋内氏志贺、鲍氏志贺、副溶血弧菌、阪崎肠杆菌、阪崎肠杆菌、小肠耶尔森氏菌、肺炎链球菌、蜡样芽孢杆菌等均无交叉反应。