[发明专利]一种用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针，其特征在于，所述的探针包括检测抗体或核酸适配体及0.5mg/ml-5mg/ml具有生物酶活性物质表面修饰的磁珠纳米颗粒，和0.1mM-100mM可被上述酶催化的底物，及1nM-100nM金纳米颗粒溶液；或所述的探针不包括磁珠纳米颗粒，即该探针仅包括检测抗体或核酸适配体及具有生物酶活性物质，和0.1mM-100mM可被上述酶催化的底物，及1nM-100nM金纳米颗粒溶液。 

2.如权利要求1所述的用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针，其特征在于，所述的磁珠纳米微球颗粒包括磁性纳米颗粒、碳纳米颗粒、二氧化硅纳米颗粒、乳胶体纳米颗粒、陶瓷纳米颗粒或聚合物纳米颗粒中的至少一种。 

3.如权利要求1所述的用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针，其特征在于，所述的具有酶活性物质包括羧酸酯酶类、硫酯酶类、磷酸单酯酶类磷、磷酸二酯酶类、硫磷酸酯酶、乙酰胆碱酯酶中的至少一种。 

4.如权利要求1所述的用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针，其特征在于，所述的抗体或核酸适配体，为一种或多种检测抗体或核酸适配体。 

5.如权利要求3所述的用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针，其特征在于，可被权利要求3中酶活性物质催化的底物，包括羧酸酯类、硫酯类、磷酸单酯类、磷酸二酯类或硫磷酸酯。 

6.如权利要求1所述的用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针，其特征在于，将具有酶活性功能的物质与纳米微球颗粒通过化学偶联的方式进行结合，所述偶联包括炔烃-叠氮法、MBS法、戊二醛法、活泼酯法、碳二亚胺法、卤代硝基苯法及亚胺酸脂法。 

7.如权利要求1所述的用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针，其特征在于，将抗体或核酸适配体与具有酶活性物质通过化学偶联的方式进行结合，所述偶联包括炔烃-叠氮法、MBS法、戊二醛法、活泼酯法、碳二亚胺法、卤代硝基苯法及亚胺酸脂法。 

8.如权利要求1所述的用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针制备方法，包括 

1)磁珠纳米微球颗粒溶液中加入过量的酶活性物质，反应0.5-3小时后，分离去除过量的酶活性物质，后加入可发生化学偶联的基团； 

2)将检测抗体或核酸适配体加入可与1)中所述的基团反应的基团，室温下反应0.5-3小时，利用离心方法去除未结合的基团； 

3)将1)与2)分别得到的产物混合，得到生物功能化的磁珠纳米微球颗粒； 

4)混有可被酶活性物质催化的相关底物和金纳米颗粒溶液混合，即得到金纳米颗粒复合溶液； 

5)生物功能化的磁珠纳米微球颗粒和金纳米颗粒复合溶液即组成了用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针。 

9.如权利要求8所述的用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针制备方法，包括： 

1)NHS活化的磁珠纳米微球颗粒溶液中加入过量的乙酰胆碱酯酶，反应0.5-3小时后，分离去除过量的乙酰胆碱酯酶，后加入NHS活化的叠氮基团； 

2)将检测抗体或核酸适配体与NHS活化的DBCO混合，室温下反应30分钟，用三羟甲基氨基甲烷终止该反应，终止反应5分钟；利用膜过滤技术将抗体或核酸适配体与未结合的DBCO分离； 

3)磁珠纳米微球颗粒-乙酰胆碱酯酶-叠氮基复合物溶液中加入结合了DBCO的检测抗体或核酸适配体溶液，得到纳米微球颗粒-乙酰胆碱酯酶-检测抗体或核酸适配体复合物，即生物功能化的纳米微球颗粒； 

4)混有可被乙酰胆碱酯酶催化的硫代乙酰胆碱和金纳米颗粒溶液混合，即得到金纳米颗粒复合溶液； 

5)生物功能化的磁珠纳米微球颗粒和金纳米颗粒复合溶液即组成了用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针。 

10.如权利要求1所述的用于疾病标志物或病原体检测的超高灵敏度探针的用途，其用于疾病生物标识物或病原微体检测或制备检测试剂。