[发明专利]一种14C标记的雌激素硫酸盐共轭物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及放射性同位素¹⁴C标记的化合物领域，特别涉及环境中雌激素硫酸盐共轭物及其制备方法。

背景技术

环境雌激素又称环境内分泌干扰物，按来源分为：天然类固醇雌激素、人工合成雌激素、植物雌激素、真菌性雌激素、环境化学污染物等。其中，人体和动物排出的天然类固醇雌激素雌酮(E1)、17β-雌二醇（17β-E2），以及人工合成的口服避孕药17α-乙炔基雌二醇（17α-EE2）在水环境中的雌激素活性最高，尤其17β-E2在浓度低至ng/L级就会产生内分泌干扰作用。目前研究发现类固醇雌激素以引起生物效应的浓度存在于污水、泉水、河流、海洋、沉积物和土壤中。由于肠道细菌的作用，少量类固醇雌激素以自由态的形式从动物粪便中排出，大部分类固醇雌激素以极性的葡萄糖醛酸盐或硫酸盐共轭物的形式从尿液排出。雌激素共轭物不能与雌激素受体结合，活性较小，但在环境介质中会通过水解重新释放具有雌激素活性的自由态雌激素，具有潜在的环境风险，Isobe等研究指出雌酮-3-硫酸盐（E1-3S）可以引起日本鹌鹑睾丸细胞减少以及睾丸重量下降，认为E1-3S是一种干扰野生动物内分泌系统的潜在因素。有文献报道，在污水处理系统中，部分雌激素葡萄糖醛酸共轭物可以转化为硫酸盐共轭物。也有文献报道，在下水道污泥中，雌激素共轭物较之自由态雌激素的降解更为缓慢，雌激素的硫酸盐共轭物比葡萄糖醛酸盐共轭物更持久，因此，研究雌激素硫酸盐共轭物在环境中的归趋具有重要意义。

但研究雌激素共轭物在土壤、底泥、畜禽粪便中的分布、迁移、转化、降解、代谢和残留等环境行为时，由于基质的干扰，往往需要对样品进行复杂的前处理，不仅耗费大量的时间，而且由于处理步骤的繁复，往往会导致回收率差。另外，由于GC-MS或LC-MS等仪器检测限的限制，实验中使用的浓度往往高于环境中的实际浓度，因此很难反映雌激素共轭物在环境中归趋的真实情况。采用¹⁴C放射性同位素示踪技术，不仅可以准确跟踪复杂体系（如天然环境样品）中的雌激素共轭物，而且可以准确定位降解代谢产物和残留物在体系中的分布，为降解和转化过程及机理的研究提供有效手段。而且这种基于放射性的测定方法可以减少研究中使用的化学浓度，使研究更接近环境真实情况。但是¹⁴C标记化合物价格十分昂贵，且有关¹⁴C标记的雌激素共轭物的实验室合成文献鲜见。

Shrestha等曾报道经三步合成[4-¹⁴C]-17β-雌二醇-17-硫酸钾（[4-¹⁴C]-17β-E2-17S钾盐）的方法：首先利用苯甲酰氯将[4-¹⁴C]-17β-雌二醇（[4-¹⁴C]-17β-E2）的C3位酚羟基保护，然后在50℃条件下与三氧化硫—吡啶复合物反应，将C-17位羟基硫酸酯化，最后在NaOH甲醇液中将C3位的苯甲酰保护基水解，生成最终产物[4-¹⁴C]-17β-E2-17S。（Shrestha,S.L.;Bai,X.L.;Smith,D.J.;Hakk,H.;Casey,F.X.M.;Larsen,G.L.Padmanabhana,G.(2011)Synthesis and characterization of radiolabeled17β-estradiol conjugates.J.Labelled Compd.Radiopharm.54:267-271.）。其不足之处在于，该方法的步骤复杂且合成的成本高。

发明内容

1.要解决的技术问题

针对现有技术中，¹⁴C标记雌激素硫酸盐共轭物仅涉及[4-¹⁴C]-17β-E2-17S钾盐一个共轭物，且制备历经三步，步骤复杂，本发明提供了一种¹⁴C标记的雌激素硫酸盐共轭物及其制备方法。该方法步骤简化，合成方法具有普适性，目标化合物放射性纯度同样达到98%以上，为后续采用¹⁴C放射性同位素示踪技术研究雌激素硫酸盐共轭物的环境归趋提供了条件。

2.技术方案