[发明专利]含海藻糖的血小板低温保存液及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物领域，具体而言，涉及一种含海藻糖的血小板低温保存液及其应用。

背景技术

目前，临床上在冰冻保存血小板时最常使用的保护剂是二甲基亚砜(DMSO)。DMSO可渗透到细胞内，属于渗透型保护剂。另外，在血小板的冻干过程中还使用了其他一些保护剂，如蔗糖(sucrose)、葡萄糖(右旋糖酐，dextrane)、海藻糖(trehalose)、聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)、白蛋白(albumin)等。

自1998年10月1日《无偿献血法》颁布实施起，我国目前临床用血全部来自无偿献血。随着成分输血的普及和推广，输注血小板已经成为临床预防和治疗出血，改善各种原因引起的血小板减少、功能障碍的重要手段。由于血小板制剂保存方法的限制，常温(22±2℃)液态振荡保存的血小板保存期短、易受细菌污染、易激活，常常难以满足临床需求；而冰冻保存的血小板存活率低，冰冻保护剂DMSO对受者有一定毒副作用，且复苏洗涤过程使得血小板质量更为降低。如何提高血小板制剂的体外保存质量，延长保存时间已成为输血医学研究的热点。

海藻糖是一种良好的生物大分子干燥保护剂，在体内可分解成二分子的葡萄糖，对机体无任何毒副作用。生物学家在自然界中发现很多能在几乎完全脱水条件下存活的生物(包括细菌、酵母、节肢动物等)，它们的共同特点是细胞内聚集了大量的双糖，最常见的是海藻糖和蔗糖。近几年，有学者研究采用海藻糖作为保护剂，用冷冻干燥法保存血液细胞，具有保存时间长，储存运输条件相对简单的优点。因此，现有的以海藻糖为主的保存方法是冰冻保存，操作过程复杂，且是在血浆介质中加入海藻糖，而本发明的含海藻糖的血小板保存液是以无机盐为基础的血小板添加液中增加海藻糖，是一种新型的血小板保存液，一方面可以在低温下保存血小板，无需冰冻，另一方面去除了部分血浆，可减少因输注血浆引起的输血副作用。

发明内容

为了提高血小板制剂的体外保存质量，延长保存时间，本发明是一种含海藻糖的血小板低温保存液及其应用。为了实现本发明的目的，拟采用如下技术方案：

本发明涉及一种含海藻糖的血小板保存液，其特征在于每升保存液中含有

在本发明的一个优选实施方式中，所述的保存液pH值为6.9-7.1之间。

在本发明的另外一个优选实施方式中，所述的保存液不包括除水之外的其它组分。

本发明另外一方面还涉及上述保存液在保存血小板中的应用。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的应用包括如下步骤：将本保存液以约70％((如一个单采治疗剂量血小板制剂容量为250-300ml，即保存液为175-210ml)等量置换出血小板制剂血浆，经37℃水浴2h(海藻糖内载入血小板胞内)后置于10℃恒温振荡保存(振摇条件如常规室温保存，振动频率60次/min，幅度5cm)。

本发明的有益效果是：本发明保存液含海藻糖，以液态较低温度(10℃)，既避免了冰冻保存对血小板损伤大的缺点，又可减少血小板制剂在常温保存下易受细菌污染的缺点。

附图说明

图1：A、B组血小板在保存期内CD62p表达变化情况；

图2：流式细胞仪检测血小板CD62p表达；

图3：A、B组血小板在保存期内HSR变化趋势；

图4：A、B组血小板在保存期内PagT变化趋势；

图5新鲜血小板形态；

图6血浆4℃组血小板3天；

图7血浆22℃组血小板3天；

图8添加液10℃组血小板3天；

图9冰冻组血小板；

图10扫描电镜观察保存至9天的血小板形态变化(左图：血浆22℃组血小板9天；右图：添加液10℃组血小板9天)。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。

实施例1

一、实验材料与仪器

1.1试验材料与主要试剂

CD41a-FITC                            美国BD公司

CD62p-PE                              美国BD公司

Mouse IgG1/FITC                       北京晶美生物公司

Mouse IgG1/PE                         北京晶美生物公司