[发明专利]基于硫酸苯酚快速高通量测定多糖含量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多糖含量的测定方法，具体涉及一种基于硫酸苯酚快速高通量测定多糖含量的方法，属于分析化学技术领域。 

背景技术

糖是构成生物体细胞组织的重要成分，是生命的物质基础之一。糖与营养代谢、细胞结构、抗病毒、增强免疫、物质运转等密切相关，人体必须从食物中摄取足够的糖以维持各项生理功能的正常运行。因此，糖含量是诸多食品的最重要营养指标之一。 

多糖含量测定的方法有很多： 

一类是利用多糖的还原性，测定还原性多糖，方法有：3,5-二硝基水杨酸盐(DNS)比色法和Somogyi-Nelson法。 

另一类测定方法，也是目前应用最普遍的方法，糠醛缩合显色法，其主要利用多糖在强酸性条件下脱水生成糠醛或其衍生物，然后与酚类(或胺类)化合物缩合，生成有特定吸收波长的有色物质这一性质进行测定。这类方法有地衣酚-硫酸(盐酸)法、苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。 

由此可见，传统测多糖方法在比色管中进行，需要加入大量的葡萄糖标准溶液和苯酚试剂，不仅检测效率低、试剂损耗多、误差大，而且对环境污染也较大。 

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种基于硫酸苯 酚的、能够实现快速、高通量测定多糖含量的方法。 

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案： 

一种基于硫酸苯酚快速高通量测定多糖含量的方法，其特征在于，包括以下步骤： 

（1）将多糖测定液和浓硫酸同时添加到微孔板中，在浓硫酸的作用下多糖水解成单糖并迅速脱水形成糠醛衍生物； 

（2）向微孔板中继续添加苯酚，苯酚与糠醛衍生物反应生成橙黄色液体； 

（3）在酶标仪中于490nm下测定多糖的光吸收值； 

（4）以葡萄糖溶液为标准液，绘制标准曲线； 

（5）将多糖的光吸收值带入标准曲线中计算多糖含量。 

前述的基于硫酸苯酚快速高通量测定多糖含量的方法，其特征在于，前述浓硫酸的浓度为98%，前述苯酚的浓度为4.5%。 

前述的基于硫酸苯酚快速高通量测定多糖含量的方法，其特征在于，前述多糖测定液、浓硫酸、苯酚的体积比为5：15:3。 

前述的基于硫酸苯酚快速高通量测定多糖含量的方法，其特征在于，在步骤（2）中，苯酚与糠醛衍生物反应的温度为90℃、反应时间为23min，反应完成后再进行5min冷却处理。 

本发明的有益之处在于：本发明基于硫酸苯酚定量碳水化合物的原理，多糖在浓硫酸的作用下，先水解成单糖并迅速脱水形成糠醛衍生物，然后苯酚再与糠醛衍生物生成橙黄色化学物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，可以用于甲基化的糖、戊糖以及寡糖 类和多聚糖的测定，并且方法简单、快速、灵敏、重复性好，颜色持久，对每种糖仅制作一条标准曲线；对于杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算，在没有必要细致划分各种单糖的情况下，采用本发明的检测方法可以一次测出总量，省去许多麻烦，具有特殊的应用价值；具有快速、高通量的特性，在微孔板中进行，由于微孔板孔多且需要的加入量小，所以可以同时测定多个样品的多糖含量。 

附图说明

图1是苯酚浓度对测定准确度的影响图； 

图2是反应时间对测定准确度的影响图； 

图3是反应温度对测定准确度的影响图； 

图4是苯酚浓度和反应时间交互作用对准确度的影响图； 

图5是苯酚浓度和反应温度交互作用对准确度的影响图； 

图6是基于微孔板法下的葡萄糖标准曲线图； 

图7是基于试管比色法下的葡萄糖标准曲线图。 

具体实施方式

以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。 

400μg/mL葡萄糖溶液：准确称取0.0400g无水葡萄糖溶于蒸馏水，定容至100mL。 

浓硫酸：浓度为98%。 

4.5%苯酚：准确称取0.4500g苯酚溶于蒸馏水，定容至10mL。 

绘制标准曲线 

以400μg/mL葡萄糖溶液作为标准溶液。 

详细的操作过程为：