[发明专利]一种解除葡萄糖抑制效应的GAL1启动子及其应用

权利要求书

1.一种解除GAL1启动子葡萄糖抑制效应的方法，其是通过去除GAL1启动子的上游阻遏序列URS1而实现的。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述GAL1启动子上游阻遏序列URS1的核苷酸序列为：TT AGCCTTATTT CTGGGGTAAT TAATC。

3.一种解除葡萄糖抑制效应的GAL1启动子，其是由权利要求1或2所述的方法制备得到。

4.一种解除葡萄糖抑制效应的pYES2质粒，其是通过去除pYES2质粒中的GAL1启动子的上游阻遏序列URS1所得。

5.一种在酵母细胞中表达牛乳铁蛋白抗菌肽LfcinB的重组质粒M-pYES2-α-LfcinB，其是通过在pYES2质粒中接入牛乳铁蛋白抗菌肽LfcinB基因序列和α信号肽基因序列、去除pYES2质粒中的GAL1启动子的上游阻遏序列URS1所得。

6.根据权利要求5所述的重组质粒M-pYES2-α-LfcinB，其特征在于，所述重组质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。

7.一种含有权利要求5或6所述重组质粒M-pYES2-α-LfcinB的酿酒酵母宿主菌。

8.一种生产牛乳铁蛋白抗菌肽LfcinB的方法，包括如下步骤：

（1）将权利要求5或6所述的重组质粒M-pYES2-α-LfB转化酵母感受态细胞；

（2）诱导表达牛乳铁蛋白抗菌肽LfcinB。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤（2）的具体操作为：挑选单克隆接种于YPD完全培养基， 28～32℃，50～250 r/min震荡培养45～55h，离心，收集酵母菌，分别用含4%半乳糖的SC培养基和和SC- U诱导培养基悬浮，使菌液终浓度达到OD₆₀₀=0. 3～0.5，置于18～22℃， 150～250 r/min的摇床诱导3～5h。