[发明专利]氯化醋酸AS-D萘酚酯酶（AS-DNCE）染色液

说明书

本发明属于医学体外诊断领域，公开了一种缓冲液组分含有皂素的氯化醋酸AS‑D萘酚酯酶染色试剂盒。采用本发明所述试剂盒染色时含皂素的缓冲液孵育血细胞，使色素能通过皂素在细胞膜上形成的空洞进入血细胞与氯化醋酸AS‑D萘酚酯酶结合显色，然后在洗涤后细胞重新封闭，色素沉淀颗粒被封闭在血细胞内，使氯化醋酸AS‑D萘酚酯酶染色后能够持久不褪色，有利于染色基团的保护。本发明试剂盒具有染色效果持久、不易脱色，且组成简单，使用方便，易做到标准化操作，广泛适用于血细胞内氯化醋酸AS‑D萘酚酯酶染色。

技术领域

本发明属于医学体外诊断领域，具体涉及氯化醋酸AS-D萘酚酯酶的染色试剂盒，尤其涉及一种化学染色法检测血细胞内特异性酯酶氯化醋酸AS-D萘酚酯酶的染色试剂盒。

背景技术

氯化醋酸AS-D萘酚酯酶（naphthol AS-D chloroacetate esterase， AS-DNCE）是一种粒细胞特异性酯酶，通常存在于粒细胞系中。目前对特异性酯酶检测常采用化学染色方法，其检测原理为血细胞内AS-DNCE将氯化醋酸AS-D萘酚水解，产生萘酚AS-D，后者与重氮剂偶联形成有色沉淀物，沉淀物的显色深浅与AS-DNCE活性成正比。

AS-DNCE几乎都存在于粒细胞系中，而单核系细胞进行 AS-DNCE染色多数为阴性，仅少数呈弱阳性。对正常人血细胞进行 AS-DNCE染色，原始粒细胞为阴性反应或阳性反应，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应，酶活性并不随细胞的成熟而增强；嗜酸性粒细胞为阴性反应或弱阳性反应，嗜碱性粒细胞为阳性反应；其他血细胞、单核细胞为阴性反应，个别可呈弱阳性反应；淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞和血小板均呈阴性反应。

对白血病血细胞AS-DNCE化学染色，可以鉴别出粒细胞和单核细胞、淋巴细胞等，在急性粒细胞白血病诊断中可作为粒细胞的标志，对白血病细胞的分型具有重要的诊断价值。对白血病血细胞染色，急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞可出现阳性反应；急性单核细胞白血病及急性淋巴细胞白血病时，白血病细胞均呈阴性反应；急性粒-单核细胞白血病时，部分白血病细胞可呈阳性反应，其阳性强度取决于原粒细胞的数量和分化程度，分化程度较好的原粒细胞呈阳性反应，但原始和幼稚单核细胞多数呈阴性反应。

目前，传统使用的AS-DNCE染色方法，染色后的涂片不能长时间保存，必须染色后及时观察，否则色素沉淀颗粒变淡甚至褪色，不利于粒细胞系阳性细胞的观察，从而影响白血病疾病的诊断分型。

发明内容

针对目前现有AS-DNCE染色方法存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种染色效果持久的氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色试剂盒，该试剂盒染色后涂片可以长时间保存。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色试剂盒，包括含皂素的缓冲液。

皂素即皂角苷，又称皂苷，英文名为Saponin，是由皂苷元和糖、糖醛酸或其他有机酸组成的能形成水溶液或胶体溶液并能形成肥皂状泡沫的植物糖苷统称。皂素是一种温和的穿膜剂，它可以在细胞膜上形成孔洞让色素或其他分子自由通过，并且在洗涤去除皂素后细胞膜上的孔洞消失，细胞重新封闭。本发明所述氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色试剂盒缓冲液组分含有皂素，采用本发明所述试剂盒染色时，含皂素的缓冲液孵育血细胞后，使色素能通过皂素在细胞膜上形成的空洞进入血细胞与氯化醋酸AS-D萘酚酯酶结合显色，然后在洗涤后细胞重新封闭，色素沉淀颗粒被封闭在血细胞内，使氯化醋酸AS-D萘酚酯酶染色后能够持久不褪色，有利于染色基团的保护。

按照本发明，上述染色试剂盒中，所述含皂素的缓冲液中皂素工作浓度优选为50mg/L～200mg/L，更优选为90mg/L-100mg/L。在一些实施例中为96.7mg/L。

按照本发明，上述染色试剂盒中，所述含皂素的缓冲液的pH值范围为7.0～8.0。