[发明专利]一种分离免疫球蛋白抗体的方法在审
申请号: | 201410142237.3 | 申请日: | 2014-04-02 |
公开(公告)号: | CN103936851A | 公开(公告)日: | 2014-07-23 |
发明(设计)人: | 代斌;贠军贤;陈良;张海燕;董莎莎 | 申请(专利权)人: | 石河子大学 |
主分类号: | C07K16/04 | 分类号: | C07K16/04;C07K1/22 |
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地址: | 832003 新疆维吾尔*** | 国省代码: | 新疆;65 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 分离 免疫球蛋白 抗体 方法 | ||
1.一种适于免疫球蛋白抗体(IgG)的层析分离方法,包括如下步骤:
(1)用pH值4.0~8.0的缓冲液和水稀释含有IgG的混合液得到上样液,以0.1~20cm/min的流速上样吸附;
(2)以去离子水或pH值4.0~8.0的缓冲液为冲洗液,冲洗掉柱子内未吸附的杂质;
(3)用含有0.01M~4M碱金属盐的pH值4.0~8.0的缓冲液为洗脱液,进行洗脱,收集含IgG的洗脱峰,得到所述的IgG。
2.如权利要求1所述的IgG的层析分离方法中的分离介质为晶胶柱,其基础柱由AAm或HEMA体系制备。
3.如权利要求1所述的IgG的层析分离方法,柱床中的晶胶介质为阴离子交换型,其功能基团为胺基。
4.如权利要求1所述的IgG的层析分离方法,其特征在于步骤(1)中所述的含有IgG的混合液为牛奶或预处理后的乳清。
5.如权利要求1所述的IgG的层析分离方法,其特征在于步骤(2)中所述冲洗液的流速在0.1~20cm/min。
6.如权利要求1所述的IgG的层析分离方法,其特征在于步骤(3)中的洗脱为梯度洗脱,洗脱液流速为0.1~20cm/min,先用含碱金属盐0.01~0.2M的pH值4.0~8.0的缓冲溶液进行洗脱,再用碱金属盐含量相应更高的pH值4.0~8.0的缓冲溶液进行洗脱,收集含IgG的洗脱峰,得到所述的IgG。
7.如权利要求1所述的IgG的层析分离方法,其特征在于所述的碱金属盐为NaCl或KCl。
8.如权利要求1~7之一所述的IgG的层析分离方法,其特征在于依次用0.1M HCl、1~2MNaCl和去离子水对步骤(3)使用过的晶胶柱床进行再生。
9.如权利要求1所述的IgG的层析分离方法,其特征在于所述方法按照如下步骤进行:
(1)以pH值4.0~8.0的缓冲溶液平衡晶胶床柱;所述晶胶柱的基础柱制备体系为AAm或HEMA,得到的晶胶介质为阴离子交换型,其功能基团为胺基;
(2)用pH值4.0~8.0的缓冲溶液稀释牛奶或预处理后的乳清得到上样液,以0.1~20cm/min的流速上晶胶柱,进行吸附;
(3)以去离子水或pH值4.0~8.0的缓冲液为冲洗液,以0.1~20cm/min的流速冲洗掉晶胶柱内未被吸附的杂质;
(4)用含有0.01~4M碱金属盐的pH值4.0~8.0的缓冲溶液为洗脱液,进行梯度洗脱,先用含碱金属盐0.01~0.2M的pH值4.0~8.0的缓冲溶液进行洗脱,再用碱金属含量相应更高的pH值4.0~8.0的缓冲溶液进行洗脱,洗脱液流速0.1~20cm/min,收集含IgG的洗脱峰,得到所述的IgG;所述的碱金属盐为NaCl或KCl;
(5)依次用0.1M HCl、1~2M NaCl和去离子水对晶胶柱进行再生。
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