[发明专利]一种Boc羟基金刚烷氨基酸的高效液相色谱拆分方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析检测领域，涉及一种Boc羟基金刚烷氨基酸的高效液相色谱拆分方法。

背景技术

沙格列汀(Saxagliptin,商品名OnglyzaTM)化学名为(1S,3S,5S)-2-[(2S)-2-氨基-2-(3-羟基三环[3.3.1.13,7]癸烷-1-基)乙酰基]-2-氮杂双环[3.1.0]己烷-3-腈，沙格列汀)，分子式为C₁₈H₂₅N₃O₂。该药物是具有手性的，沙格列汀的结构式如下所示：

据沙格列汀的文献报道，合成沙格列汀是通过非天然α-手性氨基酸衍生物和手性环丙烷三元环两个中间体得到的：中间体A (S-(3-羟基-1-金刚烷)-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸，以及中间体B ((1S，3S，5S)-2-氮杂双环 [3.1.0] 己烷-3-甲酰胺)具体如下所示：

沙格列汀的中间体中只有S-构型即3-羟基-1-金刚烷-2-(叔丁氧羰基氨基)乙酸即S-Boc-羟基金刚烷氨基酸具有药理活性。经合成得到的沙格列汀中间体中可能存在R-构型即R-Boc-羟基金刚烷氨基酸，该对映体杂质可通过后续反应，残留在沙格列汀药物中，影响药品质量。S-Boc羟基金刚烷氨基酸作为沙格列汀一个关键中间体，它的构型会对最终的产品产生重要的作用，因此控制S-Boc羟基金刚烷氨基酸中光学异构体的含量对于提高抗糖尿病类药物的质量，保证广大患者用药的安全性具有重要的意义。由于光学异构体的性质接近，目前手性对映异构体的主要的检测方法有旋光法和高效液相色谱法，由于S-Boc羟基金刚烷氨基酸没有市售标准品，并且旋光法不能测出其对映体杂质的含量。通过文献检索，并没有S-Boc羟基金刚烷氨基酸及其对映体检测的相关文献报道。

由于在沙格列汀的合成过程中必须严格控制好其关键中间体的R,S-构型的含量，因此发明一种Boc羟基金刚烷氨基酸消旋体的高效液相色谱拆分方法显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种Boc羟基金刚烷氨基酸的高效液相色谱拆分方法，该方法灵敏度高，分离度良好，结果准确可靠，适用于S-Boc羟基金刚烷氨基酸的光学质量控制。

本发明的技术方案

一种Boc羟基金刚烷氨基酸的高效液相色谱拆分方法，即采用高效液相色谱仪，以直链淀粉型手性柱，优选涂覆型手性色谱柱CHIRALPAK AD-H为色谱柱，以正己烷和乙醇组成的混合液或正己烷和异丙醇组成的混合液为流动相，采用如下的色谱分离条件进行分离：

流动相流速为0.60-1.20 mL/min，优选为1.00mL/min；

色谱柱温度为25-40 ℃，优选为35℃；

进样量为5～20 uL，优选为15uL；

检测波长为210-260nm，最佳检测波长为220 nm；

所述流动相中，按体积百分比计算，正己烷：乙醇或异丙醇为70～90%：10～30%。 

本发明的有益效果

本发明的一种Boc羟基金刚烷氨基酸的高效液相色谱拆分方法，由于采用了高效液相色谱法对R、S-Boc羟基金刚烷氨基酸进行手性拆分，能够有效的将Boc羟基金刚烷氨基酸的R、S-构型在色谱图中彻底分离，并准确的测出了其光学异构体的含量，解决了其质量控制问题，确保了最终产品沙格列汀光学异构体的过程控制，为工业化大生产带来了巨大的社会意义，具有很强的实用性。

附图说明

图1、实施例1中Boc-羟基金刚烷氨基酸的色谱分离图，保留时间为11.69 min的为S-Boc-羟基金刚烷氨基酸，保留时间7.02 min的为其对映体R-Boc-羟基金刚烷氨基酸，两者的分离度为4.24；

图2、实施例2中Boc-羟基金刚烷氨基酸的色谱分离图，保留时间为5.58 min的为S-Boc-羟基金刚烷氨基酸，保留时间4.78 min的为其对映体R-Boc-羟基金刚烷氨基酸,两者的分离度为3.38；

图3、实施例3中Boc-羟基金刚烷氨基酸的色谱分离图，保留时间为20.83 min的为S-Boc-羟基金刚烷氨基酸，保留时间11.40 min的为其对映体R-Boc-羟基金刚烷氨基酸,。两者的分离度为4.46；

图4、实施例4中Boc-羟基金刚烷氨基酸的色谱分离图，保留时间为13.00 min的为S-Boc-羟基金刚烷氨基酸，保留时间7.25 min的为其对映体R-Boc-羟基金刚烷氨基酸,。两者的分离度为4.24；