[发明专利]以电化学发光生物传感器检测DNA甲基转移酶的方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及电化学发光生物传感器，具体涉及一种以电化学发光生物传感器检测DNA甲基转移酶的方法及应用。 

背景技术

DNA甲基化在许多生物过程中有重要的作用，包括转录，基因组印记，细胞分化，染色质结构和胚胎形成。研究发现许多人类的疾病与异常基因甲基化有关。DNA甲基化是指生物体在DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase，DNA MTase）的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸（SAM）为甲基供体，将甲基转移到特定的碱基上的过程。DNA甲基化可以发生在GATC和CCA/TGG上，即腺嘌呤的N-6位、胞嘧啶的N-4位、鸟嘌呤的N-7位或胞嘧啶的C-5位。这种异常的DNA甲基转移酶的活性与癌症的发病机制有关，这种关系提供了一个在疾病的诊断和治疗的潜在目标。此外，DNA MTase是用于治疗癌症的药理学家族的新成员。因此，一种灵敏、快速的检测DNA甲基化及DNA MTase活性的方法无疑对癌症的早期诊断提供了强有力的手段，为研究基因调控的基本机制提供了见解，同时为研发新的抗癌药物提供了依据。用于DNA甲基化转移酶活性的测定的传统的方法依赖放射性同位素标记的基底，基于PCR的不同技术，毛细管电泳和高效液相色谱。这些方法时间密集，耗费DNA，需要费力的处理和特殊的同位素标记。 

电化学发光(电致化学发光)，简称ECL,是通过电极对含有化学发光物质的体系施加一定的电压或通过一定的电流，电极氧化还原产物之间或电极氧化还原产物与体系其它共存物质之间发生化学反应并生成某种不稳定的中间态物质，该物质分解而产生的化学发光现 象。电化学发光技术是电化学与化学发光相结合的检测技术，该技术既集成了发光与电化学分析技术的优点，又具有二者结合产生的可控性、选择性、重现性好、灵敏度高、检测限低及动力学响应范围宽等新优势。 

发明内容

针对测定DNA甲基转移酶的现有技术灵敏度不高、测定方法复杂等缺陷，本发明旨在提供一种以电化学发光生物传感器检测DNA甲基转移酶的方法及应用。 

申请人拟设计含有甲基化特定位点的发夹DNA捕获探针，利用限制性内切酶对识别位点甲基化敏感的特性，以不同的甲基转移酶为例，建立快速甲基转移酶活性的分析方法。同时，用此方法考察不同抗癌药物对于甲基化转移酶活性的影响，建立了一种在分子水平进行药物筛选的新思路。本发明充分利用了核酸甲基化转移酶、限制性内切酶和核酸分子探针的性质和功能，进一步发展了核酸分子技术在DNA-蛋白质（酶）相互作用研究中的应用，为研究生命活动过程提供了新的手段和方法。