[发明专利]用于分离和检测阴沟肠杆菌的显色培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离和检测肠杆菌的显色培养基，尤其涉及一种用于分离和检测阴沟肠杆菌的显色培养基。

背景技术

阴沟肠杆菌（Enterobacter cloacae）属于肠杆菌科肠杆菌属，广泛存在于自然界中，是在人和动物的粪便、水、泥土、植物中均可检出的常见菌种之一。作为条件性致病菌，阴沟肠杆菌可引起多种细菌感染性疾病，如皮肤软组织感染、泌尿道感染、呼吸道感染以及败血症等。随着头孢菌素的广泛使用，由于阴沟肠杆菌能产生超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases，ESBLs)和Amp C酶，使极易产生耐药的阴沟肠杆菌对人类的危害越来越大。此外，《科技日报》（2012-12-21一版）还报道了我国学者认为阴沟肠杆菌可能是导致人类肥胖的“致胖细菌”。因此，如何快速、准确、特异地从临床标本以及含有大量其他细菌的食品等样品、环境样品中分离且鉴别出阴沟肠杆菌对于医学治疗、保障人类健康具有重要现实意义。

目前对阴沟肠杆菌的检测以选择性培养基为主，如EMB、麦康凯琼脂、葡萄糖胆盐琼脂等，其原理是利用肠杆菌科细菌对糖类物质的产酸特性相区别，但是由于阴沟肠杆菌的生物学特性与其他肠杆菌科细菌如阪崎肠杆菌等非常相似，因此无法在现有传统培养基上直接将其与其他肠杆菌科细菌相区分。由于没有针对阴沟肠杆菌的专用培养基，现阶段需要使用2-3种选择性培养基，使得分离过程繁琐。同时，过多的疑似菌增加了后期工作量和鉴定成本。虽然近年来基于分子生物学和免疫学的快速检测方法已经出现，但一方面这些方法不能直接用于目标菌检测，另一方面，操作这些方法需要专用设备和专业技术人员，使这些方法的应用受到限制。相比较而言，利用酶活性检测和鉴别细菌是一种有效方法，该技术可以定量性或半定量和初步鉴定目标菌，无需特别专业技能和仪器，大幅度提高了工作效率。

利用细菌酶特异性分离和检测肠杆菌科细菌的显色培养基已开发出多种，如利用β-半乳糖苷酶和β-葡萄糖醛酸苷酶分离和检测大肠菌群、大肠杆菌及致病性大肠杆菌O157的显色培养基；利用辛酯酸酶分离和检测沙门氏菌的显色培养基；利用α-葡萄糖苷酶分离和检测阪崎肠杆菌的显色培养基等。通过添加专用酶底物和优化营养组分使目标菌在平板上呈现特征性菌落，从而使其得到辨别。也有利用非目标菌具有的几种特异性酶，通过添加几种底物使非目标菌的菌落出现不同颜色而目标菌无色而使其得以辨别，如分离和检测志贺氏菌的显色培养基。然而，上述培养基都不能将阴沟肠杆菌与其他肠杆菌科细菌相区分。

综上所述，目前分离和检测阴沟肠杆菌的培养基的技术瓶颈在于：一方面，一种选择性培养基很难准确地分离阴沟肠杆菌，易造成漏检；另一方面，阴沟肠杆菌很难与其他肠杆菌属细菌区分，造成假阳性结果。本领域仍然需要特异性分离和检测阴沟肠杆菌的显色培养基以及使用所述显色培养基分离和检测阴沟肠杆菌的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种特异性分离和检测阴沟肠杆菌的显色培养基以及使用所述显色培养基分离和检测阴沟肠杆菌的方法。

本发明的第一方面涉及一种培养基，其中每1000mL该培养基包括：氮源8-16g、碳源1-3g、氯化钠4-7g、琼脂12-20g、β-木糖苷酶显色底物0.05-0.5g、胆盐2-9g、抗生素1-10mg，余量为水，其中所述氮源选自胰蛋白胨和植物蛋白胨的一种或二者，所述碳源选自葡萄糖、乳糖、蔗糖、L-阿拉伯糖、棉籽糖、木糖和纤维二糖的一种或多种，所述抗生素选自氨苄西林、庆大霉素和阿莫西林的一种或多种，优选地，所述氮源是胰蛋白胨，优选地，所述碳源是葡萄糖。

在一个实施方式中，每1000mL该培养基还包括β-半乳糖苷酶显色底物0.05-0.5g，如0.05-0.4g，0.1-0.3g等。

在一个实施方式中，β-木糖苷酶显色底物为5-溴-4氯-3-吲哚-β-木糖苷。

在一个实施方式中，β-半乳糖苷酶显色底物为5-溴-6氯-3-吲哚-β-半乳糖苷。

在一个实施方式中，胆盐为去氧胆酸钠、猪胆盐、混合胆盐、牛胆盐和三号胆盐中的至少一种，优选地，胆盐为三号胆盐。

在一个实施方式中，每1000mL该培养基还包括牛肉浸出粉3-7g，如3-6g，4-5g等，或者每1000mL该培养基还包括酵母粉2-8g，如2-7g，3-6g，4-5g等。

在一个实施方式中，该培养基的pH值为5-9，更优选地，6-8，更优选地6.5-7.5，最优选地，6.8±0.2。