[发明专利]提高南美白对虾抗病力的马尾藻多糖脂质体纳米制剂

说明书

技术领域

本发明属于马尾藻多糖制剂技术领域，尤其涉及一种提高南美白对虾抗病力的马尾藻多糖脂质体纳米制剂。

背景技术

南美白对虾因其生长快、抗环境变化能力强、对饵料的要求低、具有很高的营养价值和经济价值，是目前国际水产品市场和世界虾类养殖业者深受欢迎的争夺对象。据报道2010年世界对虾养殖的总产量350万吨。我国对虾养殖产量也在逐年提高，2010年达到134.8万吨，南美白对虾的产量约占80%，为107.84万吨。为保证南美白对虾养殖的经济效益，亟待提高其抗病力。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种安全可靠、无激素、无副作用及药物残留的提高南美白对虾抗病力的马尾藻多糖脂质体纳米制剂，该制剂对南美白对虾具有免疫保护作用，可提高染毒南美白对虾的存活率。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：马尾藻多糖脂质体纳米制剂在制备提高南美白对虾抗病力药物方面的应用。

提高南美白对虾抗病力的马尾藻多糖脂质体纳米制剂，按以下工艺制备：

<1>按质量比2～8:1准确称取分析纯的大豆卵磷脂和胆固醇，用无水乙醇溶解制成质量浓度为6～18%的类脂溶液；

<2>用pH6.0～7.5的磷酸盐缓冲液搅拌溶解马尾藻多糖制成质量浓度为0.5～1.5%的马尾藻多糖溶液；

<3>一边搅拌步骤<2>所得马尾藻多糖溶液，一边将步骤<1>所得类脂溶液按体积比2～5:1缓缓地注入其中，继续搅拌1～2小时，挥发除去乙醇得马尾藻多糖脂质体混悬液。

搅拌置于磁力搅拌机上45～65℃恒温搅拌，搅拌速度为1500～1800r/min。

注入采用5号注射器针头且保持针头在液面以下。

本发明的马尾藻多糖脂质体纳米制剂采用乙醇注入法，操作简便，适合大量生产，应用于生产马尾藻多糖脂质体纳米制剂包封率达38%，平均粒径为203nm，且多数在于190～342nm之间，脂质体产品较理想，为今后规模化生产提供了很好的工艺路线，可有效地提高其制剂的药效，保证这种替代抗生素和化学药物饲料添加剂的天然药物高新制剂的市场供应。试验证明，马尾藻多糖脂质体纳米制剂可提高南美白对虾抗病力。饲料中添加马尾藻多糖脂质体纳米制剂，可显著提高南美白对虾的溶菌酶活性，具有免疫促进作用；还能显著提高染毒南美白对虾的存活率，具有较好的保护效果。

具体实施方式

马尾藻多糖纳米脂质体的制备、质量评价及毒性观察

以下分别采用逆相蒸发法和乙醇注入法研究马尾藻多糖脂质体(Sargassum polysaccharide liposome,SPL)的制备工艺，比较两种方法的优劣和适用性；对其质量进行评价，包括外观形态、粒径及其分布、包封率等；并进行毒性观察，为马尾藻多糖脂质体的开发利用提供一些参考依据，并选取适当的马尾藻多糖浓度作为下一步实验应用的参考标准。

1、材料与方法

1.1药品与试剂

马尾藻多糖，广西大学动科院药理实验室提取。大豆卵磷脂、胆固醇、氯仿、乙醚、无水乙醇、磷酸二氢钾、十二水磷酸氢二钠、氯化钠等均为国产分析纯。

1.2试剂的配制

0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS，pH=7.0)：准确称取磷酸二氢钾0.54g、十二水磷酸氢二钠2.15g、氯化钠4.5g，加蒸馏水定容至1000mL。

1.3仪器设备

AB104-L分析天平（瑞士梅特勒）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHB-D型微型循环水真空泵（郑州长城仪器厂）；KQ-50B超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）；磁力加热搅拌器（常州市华普达教学仪器有限公司）；冷冻超速离心机（SIGMA）；Zetasizer Nano S激光纳米粒度分析仪（英国Malvern instrument lid）。

1.4逆相蒸发法制备不同浓度的SPL