[发明专利]一种细胞色素P4503A5的特异性抑制剂及其应用

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及一种细胞色素P4503A5酶的高选择性抑制剂及其应用。

背景技术

细胞色素P450酶（Cytochrome P450,CYP）超家族包含了机体内最重要的药物代谢酶，参与约80%以上上市药物的代谢，CYP3A亚家族代谢的药物就占到约50%。CYP3A4、3A5、3A7以及3A43是目前已报道的人体中的四种CYP3A的亚型。其中，CYP3A4、3A5是成年人的肝、肠、肾、脾、心脏各器官等关键器官中主要表达的3A家族中的亚型。在氨基酸序列上，二者具有83%的同源性。因此，二者的底物具体性和抑制剂选择性也极其相似。CYP3A4平均占总细胞色素P450酶含量的30～60％（Annu Rev Pharmacol Toxicol1999，39:1–17），一直被认为在CYP3A亚家族介导的药物代谢中贡献最大。相对而言，CYP3A5在不同种族、不同个体中的表达量存在极大的差异。据报道，有二分之一的美国黑人表达CYP3A5，表达这种亚型的人在高加索人中只占三分之一（Nat Genet2001，27:383–391），而在某些个体CYP3A5的表达量只占CYP3A总量的2-4%（Drug Metabo Dispos2003，31:755–61.）。同时，CYP3A5的不同基因型转录表达的3A5酶活性具有很大的差异。具有CYP3A5^*1等位基因的个体可表达出具有催化功能的3A5酶，但具有CYP3A5^*3等位基因的个体转录表达功能性蛋白的能力则大大下降（Drug Metab Dispos2002，30:1108–14）。总之，CYP3A5在不同个体间的表达量及表达亚型的差异都很大，因此常导致个体代谢行为的巨大差异（Nat Genet2001，27:383–391）。

在候选化合物的早期ADME研究中，针对人体关键代谢酶的代谢稳定性研究、酶动力学研究及反应表型研究等研究内容已受到药物行业的关注。其中，CYP代谢表型研究不仅能揭示目标候选化合物的代谢特征及主要代谢酶，更对临床上代谢介导的潜在的药物间相互作用具有提示、警示的作用。在进行反应表型研究时，特异性探针底物/抑制剂是研究行进的关键与保证。因此，CYP各亚型酶间特异的底物与抑制剂的研究与发现在药物研究中占有重要作用。之前，部分学者利用咪达唑仑（CYP3A4和CYP3A5的共底物）的1’-羟化产物和4-羟化产物的比率表征CYP3A5在人肝中的活性（Biochem Pharmacol1994,47:1643–53;Nat Genet2001,27:383–91）。但由于CYP3A4也参与咪达唑仑的羟化反应，通过这种方法得出的表征结果偏差往往很大。此外，在狗中CYP3A亚家族主要表达两种亚型，分别为CYP3A12和CYP3A26。CYP3A12与人体表达的CYP3A4在催化特征与表达量等方面较为相似，CYP3A26与CYP3A5在各方面上较为相似（JPharmacol Exp Ther1997,283:1425-32）。而在鼠、兔、猪、猴等他常用的动物中表达的CYP3A5同工酶的表达量和催化能力都因缺乏高选择性的底物/探针而无从研究。因此，利用CYP3A5的高特异性抑制剂可在表型归属方面实现对不同种属中CYP3A5的同功酶的评价与考察。

目前，CYP3A5酶活性的体外评价体系主要包括重组单酶﹑哺乳动物的亚细胞组分﹑新鲜提取的肝细胞﹑原代培养肝细胞、肝切片﹑肝灌流等（Toxicology in Vitro2006，135–153），其中已经商品化的重组CYP3A5单酶主要来自于细菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞以及酵母菌建立的克隆表达体系，而亚细胞组分主要包括微粒体、细胞胞浆及S9成分。采用这些标准化的评价体系，结合相应的辅因子（如：NADPH等）和孵育条件，可通过特异的抑制CYP3A5介导的代谢清除或产物生成，对上述各种体系中表达的CYP3A5酶活性进行表征。

此外，CYP3A5抑制剂还可用于延长CYP3A5代谢药物的体内暴露时间。对于CYP3A5主要参与代谢的药物，CYP3A5特异性抑制剂可在不干扰其他代谢酶的催化活性的同时，高选择性的抑制CYP3A5的催化能力从而延长如他克莫司等药物的代谢半衰期。同时，对于高表达CYP3A5的个体，合理使用CYP3A5的抑制剂可提高他克莫司等药物的暴露量，提高药物的有效性。因此，研发CYP3A5的高特性抑制剂是十分可行与必要的。

发明内容