[发明专利]一种正品冬虫夏草的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及正品冬虫夏草的检测方法。 

背景技术

冬虫夏草为麦角菌科冬虫夏草菌Cordyceps sinensis(Berk.)Sacc.寄生在鳞翅目蝙蝠蛾科昆虫幼虫体上的幼虫尸体及子座的复合体，具有补肾益肺、止血化痰之功效，与人参、鹿茸并称为中国三大补药，在临床上常用于治疗久咳虚喘、阳痿遗精、劳嗽咯血、腰膝酸软等肺肾疾病。现代药理学研究证明，冬虫夏草具有免疫调节、抑制肿瘤细胞生长、保护肝肾功能、促进心脑血管循环、降低血糖等药理作用，在临床上具有独特的疗效。 

由于冬虫夏草作用明显，生长环境特殊、资源稀少，价格昂贵，市场上出现大量掺伪品、混淆品，常见的混淆品包括蛹虫草（又称北虫草）、凉山虫草、亚香椿虫草（又名古尼虫草）、金针虫草，常见的伪品主要由地蚕、石蚕、僵蚕、甘遂等。 

然而，目前冬虫夏草的鉴定方法多以形状、大小、颜色等形状进行鉴别，跟鉴定人的经验技术有很大关系，难以准确鉴定。需要寻找一种简便、准确、可靠的鉴别方法。 

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种正品冬虫夏草的检测方法，还提供了冬虫夏草特有的10种蛋白质及其用途。 

本发明首先提供了十种新的、正品冬虫夏草特有的蛋白质，它们的分子量和N端序列分别如下： 

蛋白1：分子量为13.136KDa，N端序列为GAVLWVPSV； 

蛋白2：分子量为11.749KDa，N端序列为DQEYTVF； 

蛋白3：分子量为13.871KDa，N端序列为KRHEVVYPW； 

蛋白4：分子量为22.535KDa，N端序列为YWSMNEK； 

蛋白5：分子量为35.674KDa，N端序列为HRDQNPE； 

蛋白6：分子量为34.061KDa，N端序列为CMTWYE； 

蛋白7：分子量为36.931KDa，N端序列为LPWFRHY； 

蛋白8：分子量为39.032KDa，N端序列为PVAGMSK； 

蛋白9：分子量为96.178KDa，N端序列为CTWSPRV； 

蛋白10：分子量为95.497KDa，N端序列为GAVLWVPSV。 

本发明正品冬虫夏草的检测方法，它是检测待检样品中含有前述10种蛋白的任意一种或者任意多种的方法。 

本发明正品冬虫夏草的检测方法，它包括如下步骤： 

（1）取待检样品，组织破碎，用中性缓冲液浸提，离心，得上清液； 

（2）检测步骤（1）所得上清液含有分子量为13.136kDa、11.749kDa、 13.871kDa、22.535kDa、35.674kDa、34.061kDa、36.931kDa、39.032kDa、96.178kDa和/或95.497kDa的蛋白。 

中性缓冲液，是指pH范围为6～8的缓冲液。 

浸提，系指将药材中的可溶物转移到适宜溶剂中的过程。 

优选地，步骤（1）所述组织破碎采用液氮研磨法，具体地，将待检样品置于冷研钵中，加入液氮迅速研磨成细粉。 

优选地，步骤（1）所述中性缓冲液为磷酸盐缓冲液。进一步优选地，所述所述磷酸盐缓冲液的pH为7.3。 

优选地，步骤（1）所述中性缓冲液加有抗氧化剂和表面活性剂。 

优选地，所述抗氧化剂为β-巯基乙醇；所述表面活性剂为Tween80。 

其中，所述β-巯基乙醇的浓度为0.2%～1%（w/v）；所述Tween80浓度为0.2%～1%（w/v）。优选地，Tween80浓度为0.5%（w/v）；所述β-巯基乙醇的浓度为0.2%（w/v）。 

优选地，步骤（1）所述浸提是研磨浸提。 

优选地，步骤（1）所述浸提的时间是1～4h，优选为4h。 

步骤（2）中，所述分子量为13.136KDa的蛋白质，其N端序列为GAVLWVPSV。 

所述分子量为11.749KDa的蛋白质，其N端序列为DQEYTVF。 

所述分子量为13.871KDa的蛋白质，其N端序列为KRHEVVYPW。 

所述分子量为22.535KDa的蛋白质，其N端序列为YWSMNEK。 

所述其分子量为35.674KDa的蛋白质，其N端序列为HRDQNPE。 

所述分子量为34.061KDa的蛋白质，其N端序列为CMTWYE。