[发明专利]纳米荧光微粒用作多重PCR产物的液相蛋白芯片的用途

说明书

技术领域

本发明涉及液相蛋白芯片领域，尤其是涉及一种纳米荧光微粒用作多重PCR产物的液相蛋白芯片的用途。

背景技术

聚合酶链式反应(PCR)是无需使用活生物体而酶促复制DNA的分子生物学技术。PCR在医学和生物研究实验室中普遍用于多种任务，例如检测遗传疾病、鉴定基因指纹、诊断感染性疾病、克隆基因、亲子鉴定和DNA计算。由于其无与伦比的扩增和准确性能力，分子生物学家已将PCR作为核酸检测的首选方法。通常在PCR反应的终点或平台期进行DNA检测，这使得难于定量起始模板。实时PCR或动态PCR通过随着反应进程而记录扩增子浓度而提高了终点PCR分析的性能。扩增子浓度最常通过与被扩增靶标相关的荧光信号变化来记录。

液相芯片，也称为微粒体悬浮芯片(suspension array，liquid chip)，是基于xMAP(flexible Multi Analyte Profiling)技术的新型生物芯片技术平台，它是在不同荧光编码的微粒上进行抗原-抗体、酶-底物、配体-受体的结合反应及核酸杂交反应，通过红、绿两束激光分别检测微粒编码和报告荧光来达到定性和定量的目的，一个反应孔内可以完成多达100种不同的生物学反应，是一种新的高通量分子检测技术平台。但是由于现有编码微粒荧光易漂白的影响，使得编码微粒不稳定，影响检测结果。近年来，有学者采用量子点编码微粒，但由于量子点发射荧光范围有限，编码技术不成熟等问题，也一直没有得到广泛应用。

因此，现阶段，缺乏一种高效地、高通量的蛋白检测方法和相应的生物芯片，这大大限制了蛋白质组学的研究进展。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种纳米荧光微粒用作多重PCR产物的液相蛋白芯片的用途，采用本发明的纳米荧光微粒和靶向探针相结合，使之适用于多重PCR产物的液相蛋白芯片检测。

为实现上述目的，本发明提出如下技术方案：一种纳米荧光微粒用作多重PCR产物的液相蛋白芯片的用途，所述纳米荧光微粒具有包括内核与外壳的核壳结构，粒径为300～600nm，所述内核为包含有荧光分子的聚合物微粒，所述外壳具有修饰在所述聚合物微粒外表面上的一种或多种官能团，所述聚合物微粒为聚甲基丙烯酸甲酯的微粒或甲基丙烯酸甲酯与其它单体共聚形成的共聚物的微粒或两者的混合物，其中甲基丙烯酸甲酯的重量至少占所述纳米荧光微粒总重量的50％，所述的荧光分子的重量占所述纳米荧光微粒总重量的0.05％～5％，所述纳米荧光微粒用于多重PCR产物的液相蛋白芯片检测。

优选地，所述纳米荧光微粒与靶向探针偶联用于多重PCR产物的液相蛋白芯片检测。

更进一步地，所述甲基丙烯酸甲酯与其它单体共聚形成的共聚物中，甲基丙烯酸甲酯与所述其它单体的结构单元数均大于等于50。

所述其它单体为选自氟乙烯、氯乙烯、溴乙烯、乙烯碘化、苯乙烯以及丙烯酸中的一种或多种。

所述官能团为选自羧基，乙醇胺基，羟基，胺基，氨基，亚胺基，环氧基，异氰酸酯基，金属醇盐及聚乙二醇基中的一种。

所述荧光分子为罗丹明、荧光素及其衍生物、肾上腺素染料及氟硼莹中的一种或多种。

所述荧光分子的重量优选为所述纳米荧光微粒总重量的0.05％～5％，可表达不同强度的荧光，适用于编码荧光微粒。

优选地，所述纳米荧光微粒的粒径为350～400nm，所述纳米荧光微粒的粒径最优为370～390nm。

所述纳米荧光微粒还包含一种或者一种以上的通过所述官能团共价连接而覆盖在所述微粒表面的生物活性物种，该所述的生物活性物种选自抗体、抗原、核酸、配体、受体、人工多肽、蛋白质以及多糖中的一种，所述的生物活性物种能够参与特异性识别和结合反应。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明的每个纳米荧光微粒上都能够被连接上大量的荧光分子，是非常好的荧光信号放大的载体，应用于多重PCR的液相蛋白芯片检测中，可以大大提高检测灵敏度，且纳米荧光微粒非常稳定，受外界影响小，荧光稳定，这为通过荧光进行定量检测提供了良好的条件，因此，本发明纳米荧光微粒是荧光检测技术中高灵敏度分析检测和定量测试中的理想标记。

2、本发明纳米荧光微粒可用可见光光源激发以及通过简单的方法获得，降低液相蛋白芯片检测分析成本。