[发明专利]诱导体细胞转分化为神经干细胞的方法及其应用

权利要求书

1.一种小分子组合物的用途，其特征在于，用于非治疗性地在不引入外源性基因且低氧环境下诱导体细胞转分化为神经干细胞，其中所述小分子组合物由以下组分构成

(a)组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂；

(b)糖原合成酶激酶-3(GSK-3)抑制剂；

(c)转化生长因子β(TGF-β)信号通路抑制剂；和

(d)任选的药学上可接受的载体。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的低氧环境为氧浓度3-8％的环境。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的体细胞包括成纤维细胞、上皮细胞。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的成纤维细胞包括小鼠胚胎成纤维细胞、小鼠尾尖成纤维细胞、人皮肤成纤维细胞。

5.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述的上皮细胞分离自人尿液。

6.一种体外诱导体细胞转分化为神经干细胞的方法，其特征在于，在低氧环境以及权利要求1或2所述的小分子化合物组合存在的培养条件下，不引入外源基因，培养体细胞。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的小分子化合物组合中，HDACs抑制剂包括丙戊酸(VPA)、丁酸钠(NaB)、或曲古抑菌素A(TSA)；和/或

所述的GSK-3抑制剂包括CHIR99021、氯化锂(LiCl)、或碳酸锂(Li₂CO₃)；和/或

所述的TGF-β信号通路抑制剂包括Repsox、SB431542、或曲尼司特(Tranilast)。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物组合中各组分的最低有效浓度如下所示：

HDACs抑制剂：VPA：0.2-1mM；NaB 0.2-1mM；TSA 5-20nM；

GSK-3抑制剂：CHIR99021 1-5μM；LiCl 0.5-3μM；Li₂CO₃ 0.05-1mM；

TGF-β抑制剂信号通路：Repsox 0.2-3μM；SB431542 0.2-3μM；Tranilast 10-50μM。

9.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的培养为至少培养4代。

10.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的培养条件还包括采用神经干细胞培养基。

11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述的神经干细胞培养基含有表皮生长因子EGF、碱性成纤维细胞生长因子bFGF、肝素或其组合。

12.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的低氧环境为氧浓度为4-6％。

13.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述小分子化合物组合中各组分的最低有效浓度如下所示：

HDACs抑制剂：VPA：0.3-0.8mM；NaB:0.3-0.8mM；TSA:8-15nM；

GSK-3抑制剂：CHIR99021:2-4μM；LiCl:1-2μM；Li₂CO₃:0.1-0.8mM；

TGF-β抑制剂信号通路：Repsox:0.5-2μM；SB431542:0.5-2μM；Tranilast 20-40μM。