[发明专利]一种从贝壳类原料中提取麻痹性贝类毒素的方法

说明书

技术领域

本发明属于有机化合物提取领域，尤其是涉及一种从贝壳类原料中提取麻痹性贝类毒素的方法。

背景技术

麻痹性贝类毒素(paralytic shellfish poisoning toxins,PSP)是一类对人体神经系统产生麻痹作用的海洋生物毒素，主要由有毒甲藻产生，可通过食物链在贝类，如：翡翠贻贝、栉孔扇贝、嵌条扇贝、文蛤、青蛤、近江牡蛎和织纹螺等生物体内累积放大。当人们误食这些染毒的海产品时,就会发生中毒或死亡。麻痹性贝类毒素的在全球分布越来越广，频率越来越高，每年发生2000起中毒事件，其中死亡率达到15%。PSP毒素是以石房蛤毒素(Saxitoxin，STX)为骨架而衍生出来的一类四氢嘌呤的衍生物如式I所示，现已发现该类毒素有50余种结构组成成分，根据R4基团的不同可将该毒素分为氨基甲酸酯类、N-磺酰氨甲酰基类、脱氨甲酰基类和脱氧脱氨甲酰基类。

式I

目前，麻痹性贝类毒素在赤潮检测、分子生物学、神经生物学、医学诊断、药物开发、军事战剂等研究中都有应用。在食品卫生和安全方面，随着海洋环境的恶化，赤潮的大量发生，国内外对贝毒的检验更加重视。关于麻痹性贝类毒素的提取一般采取利用海水培养产毒藻类的方法，但这在地域上有一定限制。而从贝类组织中提取富集的毒素，由于此类毒素含量很低，在提取浓缩过程中容易受到贝类基底物质如蛋白质、脂肪、糖类等物质的影响，很难提取到纯度比较高的样品用于毒素相关研究。

发明内容

本发明的目的是提供一种从贝壳类原料中提取麻痹性贝类毒素的方法。

本发明提供的从贝壳类原料中提取麻痹性贝类毒素的方法，包括如下步骤：

1）将贝壳类原料与醋酸水溶液混匀至混合物的pH值为2-4后，超声破碎，再置于沸水中加热5-10min，冷却后过滤，收集滤液；

2）将步骤1）所得滤液减压浓缩后冷冻离心，取上清液用三氯甲烷萃取，取上层萃取液与乙醇混匀后于室温搅拌20-24小时后，进行第二次离心，收集上清液减压浓缩后干燥，再用酸化甲醇溶解后过滤，收集滤液干燥后，溶于pH值为2-4的醋酸水溶液后，上样于凝胶柱进行柱层析，收集保留时间为160min-250min的流分，得到含有所述麻痹性贝类毒素的提取液；

所述酸化甲醇由体积比为2-5：95-98的乙酸和甲醇组成。

上述方法的步骤1）中，所述醋酸水溶液的浓度为0.05-0.2M，具体为0.1M；

混合物的pH值为2-3；

超声破碎步骤中，功率为600-1500W，具体为600W，时间为8-30min，具体为8-10min。

步骤2）所述步骤2）冷冻离心步骤中，转速为4000-6000rpm，具体为4000-5000rpm；离心半径为4-6cm，具体为5cm；

时间10-12min，具体为10min；

温度为3-7℃，具体为4℃；

所述第二次离心步骤中，转速为8000-10000rpm；离心半径为4-6cm，具体为5cm；时间为8-10min。

酸化甲醇可溶解毒素，并能够去除其它剩余水溶性杂质；

收集滤液干燥步骤中，干燥的目的是为了除去所述酸化甲醇。

所述干燥的方法可为真空冷冻干燥；

所述步骤2）柱层析步骤中，上样量为所用凝胶柱体积的2-5%，具体为3-4%；

洗脱剂为pH值为2-4的醋酸水溶液；

洗脱速度为0.4-0.6mL/min，具体为0.5mL/min；

洗脱剂的用量为所用凝胶柱体积的3-5倍，具体为4倍；

所用凝胶柱中，凝胶的型号为Sephadex G15或Bio-Gel-p-2；

长径比为30-40：1，具体为30：1；

凝胶柱的长度为60-100cm；直径为1-5cm，具体为2cm。

所述保留时间具体可为160min-200min或200min-250min；

所述贝壳类原料具体可为虾夷扇贝或华贵栉孔扇贝。

本发明最大限度地提高了麻痹性贝类毒素的提取率，能有效地去除组织内脂肪、蛋白质、糖类等杂质；并使毒素的生物活性损失减少到最低程度；且原料更容易获得，提取浓缩过程中，处理温度较低，具有重要的应用价值。

附图说明

图1为实施例1和2中Sephadex-G15凝胶柱分离荧光检测谱图。

具体实施方式