[发明专利]Au/Fe3O4免疫层析试纸条及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种Au/Fe₃O₄免疫层析试纸条及其制备方法与应用。 

背景技术

免疫层析技术是20世纪90年代初发展起来的一种新型免疫检测技术，是把免疫反应转移到了玻璃纤维和硝化纤维膜上进行，不需要进行结合标记物与自由标记物的分离。省去了繁琐的加样、洗涤步骤，因而操作简单，快速（20分钟内出结果），人员不用培训，不需或仅需简单的仪器，而且它保留了以前种种免疫检测技术中抗体抗原反应特异性的优点，非常适合现场检测，现在已经广泛地应用于医学、农业、畜牧兽医、环境、食品监管等各种检测领域。 

在传统的免疫层析系统中，用作可视或者被仪器检测的指示物通常包括胶体金，磁珠，胶体硒，乳胶颗粒和量子点等物质，其中以胶体金作为标记的胶体金免疫层析试纸条和以磁性纳米粒子作为标记的磁性免疫层析试纸条倍受广泛学者的青睐。因为胶体金免疫层析试纸条在制备过程中，胶体金具有很好的生物相容性，易于标记，在使用过程中具有快速，简捷，单人份操作，但是缺点是只能实现半定量。因此一些研究工作者通过用磁珠代替胶体金作为标记，构建磁性免疫层析试纸条，并借助相关弱磁信号阅读仪，实现对样品的定量快速检测，并且在标记过程中借助磁性分离架，可以实现快速分离洗涤，但是和胶体金试纸条做比较，磁性免疫层析试纸条的制备过程中，标记过程十分繁琐，需要对磁珠的表面进行修饰。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于检测待测病毒的Au/Fe₃O₄免疫层析试纸条。 

本发明提供的检测待测病毒的Au/Fe₃O₄免疫层析试纸条，包括支持板和放置在其上的样品垫、灌注有Au/Fe₃O₄标抗体的偶联垫、含有检测线T和质控线C的NC膜和吸水垫； 

所述Au/Fe₃O₄标抗体为Au/Fe₃O₄纳米粒子标记待测病毒的抗体。 

Au/Fe₃O₄表示Au包裹在Fe₃O₄上。 

上述试纸条中，所述Au/Fe₃O₄纳米粒子中的Fe₃O₄纳米粒子的粒径为40-50nm； 

所述待测病毒的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体。 

上述试纸条中，所述待测病毒的抗体为单克隆抗体； 

所述检测线T由所述待测病毒的多克隆抗体形成； 

所述质控线C由鼠源抗lgG抗体形成。 

上述试纸条中，所述鼠源抗lgG抗体为兔抗鼠lgG； 

所述待测病毒为禽流感病毒； 

所述禽流感病毒具体为H7亚型禽流感病毒。 

本发明的另一个目的是提供一种制备上述的试纸条的方法。 

本发明提供的方法，包括如下步骤： 

1）先将标记物Au/Fe₃O₄纳米粒子悬浊液和待测病毒单克隆抗体混匀，反应，收集固体反应物，再将所述固体反应物经BSA封闭，即得到Au/Fe₃O₄标抗体； 

在所述步骤1）的所述封闭后，还包括如下步骤：将所述封闭的产物收集沉淀，再溶解，得到Au/Fe₃O₄标抗体。 

上述封闭采用的缓冲液为含有质量百分含量为1%的BSA的20mmol/L硼酸钠水溶液； 

所述溶解采用的缓冲液为含有1%BSA和0.1%叠氮钠的20mmol/L的硼酸钠水溶液。 

2）制备灌注有Au/Fe₃O₄标抗体的偶联垫和含有检测线T和质控线C的NC膜；