[发明专利]用于检测手足口病肠道病毒蛋白的单克隆抗体与试剂盒

说明书

本发明涉及用于检测手足口病肠道病毒蛋白的单克隆抗体，以及采用该特异性单克隆抗体制备的ELISA检测试剂盒。本发明所述的抗手足口病肠道病毒蛋白的单克隆抗体是由保藏号为CCTCC NO:C2013161的杂交瘤细胞株HEV71‑vP1‑4G12产生，能特异性识别HEV71‑VP1蛋白中的序列号为SEQ ID NO:1的氨基酸序列。本发明所述的用于检测手足口病肠道病毒蛋白的ELISA检测试剂盒，包含ELISA酶标板、捕获抗体、包被抗原、酶标二抗、链亲和素‑辣根过氧化物酶、显色液、稀释液、终止液，其中，所述捕获抗体为如本发明所述的单克隆抗体，所述包被抗体为抗HEV71‑VP1多克隆抗体。该试剂盒对于手足口病肠道病毒蛋白提供了快速、特异、敏感的检测方法。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及抗体工程技术，具体涉及用于检测手足口病肠道病毒蛋白的单克隆抗体，以及采用该特异性单克隆抗体制备的ELISA检测试剂盒。

背景技术

手足口病（Hand foot and mouth disease，HFMD）是一种由肠道病毒引起的常见儿童传染病，又名发疹性水疱性口腔炎，多发生于3岁及3岁以下婴幼儿童，可引起手、足、口腔等部位的疱疹或者皮疹，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等并发症。个别重症患儿如果病情发展快，易导致死亡。该病以手、足和口腔粘膜疱疹或破溃后形成溃疡为主要临床症状。手足口病是由肠道病毒引起的传染病，其传染性强，传播途径复杂，传播快，在短时间内即可造成大流行。引发手足口病的肠道病毒有20多种（型），其中以柯萨奇病毒A16型（Cox A16）和肠道病毒71型（EV71）最为常见。

针对HFMD的病毒类型，目前常用诊断方法为血清学中和实验、病原学细胞接种、分子生物学逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）或real-time RT-PCR（rRT-PCR）等。这些方法在不同的领域发挥着相应的重要作用，但相应的也暴露出一些问题：这些方法都比较繁琐且对相应的试剂和临床样本需求量较大，咽试子和肛试子等标本成分复杂，病毒载量低，易出现假阴性，另外检测的费用高，易产生交叉反应，且需要专业人士进行操作，否则很难保证最终结果的准确性。

发明内容

为了克服以上问题以及满足检测手足口病的市场需要，本发明的目的在于提供一种用于检测手足口病肠道病毒蛋白的单克隆抗体。

本发明所述的用于检测手足口病肠道病毒蛋白的单克隆抗体是由保藏号为CCTCCNO:C2013161的杂交瘤细胞株HEV71-vP1-4G12产生，能特异性识别HEV71-VP1蛋白中的序列号为SEQ ID NO:1的氨基酸序列。

本发明所述的杂交瘤细胞株HEV71-vP1-4G12，其保藏号为CCTCC NO:C2013161，保藏单位为中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址是中国湖北省武汉市武汉大学；保藏日期为2013年10月17日。

本发明是通过间接ELISA法确定所述的单克隆抗体的抗原表位。通过重组蛋白免疫得到的单克隆抗体，检测来源于HEV71-VP1蛋白序列的7组不同肽段，这7组不同肽段通过分子相互作用力、疏水性等生物信息学预测抗原表位原理统计得出，以及通过DNASTAR,SWISSMODEL等生物信息学软件预测得出。由显色反应可知，本发明所述抗体的表位是在其中的第二组肽段序列中（Gly-Glu-Ile-Asp-Leu-Pro-Leu-Lys-Gly-Thr-Thr-Asn-Pro-Asn-Gly-Tyr-Ala-Asn-Tr p-Asp-Ile-Asp），该序列编号为SEQ ID NO:1。

根据本发明所述的单克隆抗体的进一步特征，所述单克隆抗体能特异性识别SEQID NO:1的氨基酸序列中的5至22个氨基酸。由于抗原表位识别序列最短为5个氨基酸，而SEQ ID NO:1的氨基酸序列全长为22个氨基酸，可知所述单抗的表位在该氨基酸序列的5至22个氨基酸之中。

本发明进一步提供一种用于检测手足口病肠道病毒蛋白的ELISA检测试剂盒。