[发明专利]美国红鱼抗病毒蛋白（viperin）及其制备和应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体的说是一种美国红鱼viperin及其制备和应用。

背景技术

Viperin是一种与内质网相关的、受干扰素诱导的抗病毒蛋白，其分子量约为40kDa。从低等脊椎动物到哺乳动物viperin均呈现出高度的氨基酸序列保守性，其蛋白结构均包含一个SAM酶（S-adenosyl methionine-dependent radical enzymes）结构域和一个高度保守的C末端区域。Viperin通过其N-端α螺旋结构锚定在内质网膜或脂质体上。由于内质网和脂质体是病毒蛋白合成和病毒扩增所必需的场所，所以在这两个细胞器上的定位对于viperin行使抗病毒功能有着至关重要的作用。在正常情况下viperin的表达水平非常低，然而当受到病毒（包括DNA和RNA病毒）、脂多糖或者I型干扰素的刺激后viperin的表达水平会骤然上升。目前已知的哺乳类viperin抗病毒机制主要有（1）干扰破坏病毒出芽所必需的脂筏结构；（2）干扰病毒蛋白与宿主蛋白的相互作用从而影响病毒的组装。然而，鱼类viperin研究较少，其抗病毒作用尚不清楚。

发明内容

本发明目的在于提供一种美国红鱼viperin及其制备和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种美国红鱼抗病毒蛋白（viperin），美国红鱼抗病毒蛋白序列为SEQ ID No.1中氨基酸所示。

一种美国红鱼抗病毒蛋白的制备方法，以美国红鱼cDNA为模板，用引物F1和R1进行PCR扩增，PCR产物纯化后与质粒pCN3用T4DNA连接酶连接，连接液转化入大肠杆菌，筛选转化子提取质粒，即得到表达SEQ ID No.1中氨基酸的viperin的质粒pVip；所述F1为5’-GATATCATGCAGCTCTCCTCTATC-3’；R1为5’-GATATCCCACTCCAGCTTCATGT-3’。

一种美国红鱼抗病毒蛋白（viperin）的应用，所述表达SEQ ID No.1中氨基酸的viperin的质粒pVip在制备抗病毒感染的制剂中的应用。

本发明具有如下优点：本发明的viperin表达质粒注射鱼类后能够显著提高鱼类的抗病毒能力。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。

在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法：

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化、DNA片段从凝胶中回收皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。

2.大肠杆菌用Hanahan方法（Sambrook and Russell:Molecular Cloning:A Laboratory Mannual.Cold Spring Harbor Laboratory Press2001）。

3.所有限制性内切酶和连接酶皆购自于“纽英伦生物技术有限公司”，北京。

实施例1

本发明的viperin为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列。

序列表SEQ ID No.1为：

MQLSSIVASPKQLLQLCISTLHCLLASVFSKVSSWTAGTCKESTSPVSPVDGKLDQNKVQNATTPTSVNYHFTRKCNYKCGFCFHTAKTSFVLPLEEAKRGLKLLKESGMEKINFSGGEPFLHDKGEFLGKLVQFCKQDLQLPSVSIVSNGSMIKEKWFQKYGDYLDILAISCDSFDEETNQLIGRAQGRKSHLDNLYKIRNWCQQYKVAFKINSVINTFNVDEDMTESITQLSPVRWKVFQCLLIDGENAGEKALREAERFVISDQLFQEFLDRHSSVSCLVPESNEKMRNSYLILDEYMRFLDCREGRKDPSKSVLDVGVKEAICFSGFDEKMFLKRGGKYVWSKADMKLEW

（a）序列特征：

●长度：354（有效长度354）

●类型：氨基酸序列

●链型：单链

●拓扑结构：线性

（b）分子类型：蛋白质

（c）假设：否

（d）反义：否

（e）最初来源：美国红鱼