[发明专利]人脂肪间充质干细胞提取物及其冻干粉和应用

说明书

技术领域

本发明涉及干细胞在生物医药或医学美容中使用的技术，尤其涉及人脂肪间充质干细胞在生物医药或医学美容中的使用。

背景技术

脂肪组织来源广泛、取材容易、细胞分离效率高、给患者带来的创伤较少、并且不涉及伦理问题，因此日益受到广泛重视。

人脂肪间充质干细胞是脂肪组织中的一类多能性干细胞，其能够分泌多种生物活性物质，包括蛋白质、多肽及细胞因子等，比如干细胞生长因子（SCGF）、血管内皮生长因子（VEGF）、胰岛素样生长因子（IGF）、肝细胞生长因子（HGF）和转化生长因子等，这些细胞生长因子能够控制或者维持受伤组织细胞，引导其自身修复。除此之外，人脂肪间充质干细胞中还含有多种膜蛋白质及生物活性因子等多种成分，这些成分相互协调相互补充，具有复杂的生理作用，能够对许多组织器官产生影响，因此具有比较好的抗光老化、抗氧化、抗皱、美白肌肤、伤口愈合、细胞修复等功效。

目前，虽然已有研究利用特定的诱导条件体外诱导干细胞分泌上清用于医疗、化妆品等方面，但是这种条件培养基是应用特定的细胞因子诱导干细胞分泌某些特定的因子从而达到疗效，细胞因子本身价格昂贵，使得干细胞的应用成本异常增高。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种具有多种生物学活性，可用于生物医药、精细化工领域的人脂肪间充质干细胞提取物。

本发明的另一个目的是提供上述人脂肪间充质干细胞提取物在制备伤口愈合药物或细胞修复药物等生物医药产品，或在制备美白产品或皮肤抗皱产品等精细化工产品中的应用。

本发明的另一个目的是提供上述人脂肪间充质干细胞提取物的冻干粉。

本发明的另一个目的是提供上述人脂肪间充质干细胞提取物冻干粉的制备方法。

本发明的另一个目的是提供上述人脂肪间充质干细胞提取物的冻干粉在制备伤口愈合药物或细胞修复药物等生物医药产品，或在制备美白产品或皮肤抗皱产品等精细化工产品中的应用。

本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：

人脂肪间充质干细胞提取物，该提取物是由如下方法制备而得：

步骤1.

将人脂肪间充质干细胞经原代分离培养后，进行传代培养，取传代培养的P3～P30代人脂肪间充质干细胞，利用细胞生长液培养至细胞80%融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后加入无血清培养液继续培养72小时后，收集无血清培养液，而未被收集的细胞进行后续处理；

步骤2.

将步骤1未被收集的细胞利用消化液消化后，超声破碎仪破碎细胞，离心后收集上清；

步骤3、

将步骤1收集的无血清培养液和步骤2收集的上清混合后，过滤，收集过滤液对其浓缩，所得浓缩液再进行除菌处理后，则制备得到所需人脂肪间充质干细胞提取物。

上述步骤1中，所述将人脂肪间充质干细胞经原代分离培养中，原代分离方法和培养方法采用本领域技术人员的常规操作即可。

上述步骤1中，所述细胞生长液是指含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养液，并且该培养液中还含有抗细菌抗生素；所述抗细菌抗生素为青霉素和链霉素两种，其中青霉素在细胞生长液中的终浓度为200 U/ml，链霉素在细胞生长液中的终浓度为250 U/ml；所述含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养液为向市售的基础DMEM/F12培养液中加入终浓度为10%的胎牛血清，并加入终浓度为200 U/ml的青霉素和终浓度为250 U/ml的链霉素即为本发明的细胞生长液。

上述步骤1中，所述磷酸盐缓冲液为pH值为7.0～7.2的PBS溶液。

上述步骤1中，所述细胞在无血清培养液中继续培养72小时，这里的无血清培养液为市售产品。

上述步骤1中，具体操作时，将传代培养的不同代细胞分别进行处理，如：将P3代的人脂肪间充质干细胞利用细胞生长液培养至细胞80%融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后将细胞加入到无血清培养液中继续培养72小时后，收集得到P3的无血清培养液；将P4代的人脂肪间充质干细胞利用细胞生长液培养至细胞80%融合时，弃掉培养液，先用磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次，然后将细胞加入到无血清培养液中继续培养72小时后，收集得到P4代的无血清培养液等等；然后将P3～P30代人脂肪间充质干细胞分别得到的无血清培养液收集合并后，则得到实施例1收集的无血清培养液；同时，将P3～P30代人脂肪间充质干细胞分别得到的未被收集的细胞收集合并后，一起进行后续处理。