[发明专利]一种从南极磷虾中提取己烯雌酚的方法及高效薄层层析扫描检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从南极磷虾中提取己烯雌酚的方法及高效薄层层析扫描检测方法。

背景技术

己烯雌酚分子式为C₁₈H₂₀O₂，分子量为268.35道尔顿，又称女性素、人造求偶素等，属于雌激素类物质，与天然雌二醇具有相同药理与治疗作用，可用于治疗妇科疾病、促进动物生长等。

南极磷虾（Euphausia superba），是一种生活在南极洲水域的磷虾，以群集方式生活，有时密度可达每立方米10000-30000只。它们以微小的浮游植物作为食物，身长大约6cm，重约2g，最长寿命可达6年。它们是南极生态系统的关键物种，若以生物质能来说，它们可能是地球上最成功的生物物种。因南极磷虾蕴藏量巨大，加上群体的生活容易捕捞，所以吸引很多国家对它进行开发。目前，南极磷虾最主要用途是作为鱼饲料。而在挪威、加拿大等国则把南极磷虾虾油提取出来作为保健品，价格约2000元/kg。由于南极磷虾含有大量氟（约2400mg kg^-1），不能直接食用。因而，以南极磷虾为原料，开发天然药物，对其综合利用，具有广阔的应用前景。

己烯雌酚的检测主要采用酶联免疫检测、荧光免疫分析、放射性受体测定等免疫检测的方法以及气相色谱、高效液相色谱、生物分析法进行，但是这些检测方法有如下的不足之处：检测过程耗时长、费用高、可能会引起环境污染等。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单、快速、准确、可靠的南极磷虾己烯雌酚的检测方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种分析己烯雌酚的高效薄层层析扫描检测方法，步骤如下：

（1）取待检测的样品液和1.0mg mL^-1的标准液5μL点于同一块GF₂₅₄高效薄层硅胶板上，以体积比为四氯化碳：乙酸乙酯：丙酮：冰醋酸：甲苯：环己烷=78-80：9-11：9-11：2-4：3d：2d的展开剂，在展开缸内展开，展距为9.5cm，展完后晾干展板；

（2）用10%硫酸乙醇溶液染色，然后置于100℃-110℃条件下烘烤5-10分钟；

（3）用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ扫描，扫描波长400nm，通过检测样品和标准品吸光度计算得到己烯雌酚的含量。

样品液是通过将己烯雌酚粗提物溶于5mL甲醇中制的。

己烯雌酚粗提物的提取方法，包括以下步骤：

（1）取干的南极磷虾（w）和甲醇(v)以1：8-11的比例在35℃、350w、40kHz的条件下超声提取，过滤提取液；

（2）将上述滤液置于旋蒸仪中蒸干，得到己烯雌酚的粗提物。

在展开缸内展开时，先将展开剂在室温条件下预平衡35-45分钟，再放入高效薄层板，继续在室温条件下展开，当展距达到4.5cm时，取出薄层板，室温下晾干10分钟，再将薄层板放入展开缸中，展开到展距为9.5cm。

制作标准曲线：

（1）精密称取1.0000mg己烯雌酚标准品（中国食品药品检定研究院）溶于1.0mL甲醇，得浓度为1.0mg mL^-1的标准液；

（2）取上述配置好的己烯雌酚标准品溶液2μL、3μL、4μL、7μL、8μL，点样于同一GF₂₅₄高效薄层硅胶板，按己烯雌酚的高效薄层层析扫描检测方法条件展开，晾干；

（3）用10%硫酸乙醇溶液染色后，用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ，400nm吸收波长扫描，经薄层扫描仪软件wincats1.4.1统计得到回归方程Y=-285.7233+643.4958X，相关性系数r=0.99946，RSD=2.57%。

本发明检测己烯雌酚的高效薄层扫描检测方法，其精密度、重复性、稳定性、回收率情况以及展开剂配方确定、染色时间及染色温度的确定、检测波长的确定如下：

1.精密度测定

精密吸取样品液，在同一块高效薄层硅胶板上水平点样5μl，展开，晾干，用10%硫酸乙醇溶液染色后用CAMAG薄层扫描仪-Ⅲ，以400nm吸收波长扫描得峰面积分别为3234.1，3301.3，3256.4，3199.2，3260.1，RSD=1.15%。

2.重复性测定