[发明专利]一种高效液相色谱法检测多抗霉素B的方法

说明书

技术领域

本发明属于农药检测分析技术领域，具体涉及一种多抗霉素B的高效液相色谱检测方法。

背景技术

多抗霉素又叫多氧霉素，在日本是从可可链霉菌素阿索变种（S.cacaoi var.asoensis）中分离到一种核苷类抗生素。而在我国是金色产色链霉菌（S.aurea chromogenes 4896）的代谢产物。

多抗霉素是由A至N 共14种不同的同系物组成的混合物，主要活性成分为多抗霉素B，属于多氧嘧啶核苷类农用抗生素类杀菌剂，能有效地抑制真菌细胞壁骨架成分——几丁质的合成，使菌体细胞壁不能进行生物合成导致病菌死亡。多抗霉素B是一种高效、低毒、无环境污染的安全农药，所以被广泛用于苹果斑点落叶病、烟草赤星病、三七黑斑病等病害的防治。

目前关于多抗霉素B检测方法的报道有生测法、HPLC法。如中国专利申请200810039564.0多氧霉素B的定量分析检测方法，报道了多氧霉素B的牛津杯生物测定法，该检测方法缺点：可靠性差，检测时间较长。 

如《化学分析计量》1999第8卷第3期的《用液相色谱二极管阵列检测器测定多氧霉素B》公开了一种检测多氧霉素B的HPLC方法，色谱条件：色谱柱：YWG-CN，250mm×4.5 mm，粒径5μm，检测波长：270nm，流速：0.8mL/min，流动相：pH=4乙酸铵缓冲溶液。如《农药》2008年第47卷第3期的《多抗霉素B的高效液相色谱分析方法》公开了一种多抗霉素B的HPLC方法,色谱条件：色谱柱：Kromasil C18不锈钢色谱柱,250mm×4.6 mm（5μm），检测波长262 nm，流速：0.6 mL/min,柱温：30℃，进样量5μL，流动相：甲醇-水（用磷酸调pH=4.0）（体积比10:90）。

多抗霉素B与多抗霉素同系物结构相似，在HPLC检测中，容易受到某些同系物的干扰。在现有HPLC检测方法中，多抗霉素B和某些同系物之间不能达到较好的分离，影响分析的准确性。因此，本领域迫切需要一种分离度良好，运行时间短的检测多抗霉素B的方法。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明旨在提供一种准确、快速的高效液相色谱法检测多抗霉素B的方法，实现多抗霉素B与其他同系物的分离，从而达到产品质量的控制。

本发明提供的高效液相色谱法检测多抗霉素B的方法，采用如下色谱条件：

色谱柱：以嵌入极性基团的烷基硅烷键合硅胶为固定相；

流动相：有机相-水相；

流速：0.5 -1.5 mL/min，优选1.0 mL/min；

检测波长：240-290nm，优选260nm；

柱温：10-40℃，优选25℃；

进样量：5-20μL，优选10μL；

检测器：紫外检测器或二极管阵列检测器。

在本发明的优选的实施方案中，上述以嵌入极性基团的烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱，优选以嵌入极性基团的十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱。

在本发明的优选的实施方案中，所述流动相中的有机相选自甲醇、乙腈。

在本发明的优选的实施方案中，所述流动相中的水相含有三氟乙酸，三氟乙酸的浓度范围为0.05%-0.13%（以重量百分比计），优选0.1%。

在本发明的优选的实施方案中，所述流动相中有机相-水相的体积比例为0：100-3:94，优选0:100。

在本发明的优选的实施方案中，所述的色谱柱和流动相配合使用。

本发明还提供一种高效液相色谱法检测多抗霉素B的方法，通过以下步骤实现：

（1）称取含适量多抗霉素B的标品，于50mL容量瓶中，用纯水溶解、定容、摇匀，过0.45μm滤膜，备供试标品溶液用。

（2）称取含适量多抗霉素B的样品，于50mL容量瓶中，用纯水溶解、定容、摇匀，过0.45μm滤膜，备供试样品溶液用。

（3）取供试标品和样品溶液，注入高效液相色谱仪，按照上述条件进行高效液相色谱分析。

与现有技术中的生测法、HPLC法相比，本发明通过所述色谱柱与所述流动相的配合使用，分离度良好，准确度高，通过本检测方法使多抗霉素B与结构相似的同系物达到很好的分离，提高了多抗霉素B检测的准确度；该检测方法的运行时间短；多抗霉素B主峰出峰时间在8min。

附图说明

下面结合附图对本发明进一步说明：

图1：按照实施例1条件分离的多抗霉素B样品高效液相色谱图；

图2：按照实施例2条件分离的多抗霉素B样品高效液相色谱图；