[发明专利]一种半夏一步成苗的组织培养方法以及新的半夏培养基

说明书

发明内容

本发明属于栽培领域，涉及一种半夏一步成苗的组织培养方法及半夏组织培养基。

背景技术

半夏(Pinellia ternata（Thunb.）Breit.)是天南星科多年生草本植物,以块茎入药,具燥湿化痰,降逆止呕,消痞散结等功效,为一种重要的传统中药材。半夏生于山地、农田、溪边或林下；分布于我国大部分地区。作为运用广泛的大宗中药材，随着市场用量的有增无减，半夏野生资源逐年锐减，已不能满足日益增长的市场需求，人工栽培势在必行。目前人工栽培采用小块茎育苗,用种量大,成本高，且存在叶型变异，子块茎多、种质退化等问题。利用组织培养技术，由外植体直接诱导分化成苗，作为种苗栽种，可提高繁殖率，防止种质退化；缩短其生长周期，有效降低栽种成本。

国内外不少学者对半夏组织培养进行了探索性研究，但是现有的研究大多集中于半夏外植体如何有效诱导成为愈伤组织，关于愈伤组织后期成苗以及半夏外植体一步成苗的研究较少。

发明内容

本发明的目的是提供一种半夏一步成苗的组织培养方法及一种新的半夏组织培养基。

本发明半夏一步成苗的组织培养方法，它包括如下步骤：

（1）取半夏块茎、珠芽、叶片和/或叶柄作为外植体，消毒，接种于培养基中，在温度为20～30℃、光照强度为1000～2000lx、光照时间5～15h/d的条件下培养；所述培养基以MS培养基为基础培养基，添加有终浓度为30～50g/L的蔗糖、1.0～2.5mg/L的6-BA和0.1～0.2mg/L的NAA；

（2）培养至苗高3～8cm时，即可。

6-BA：6-苄氨基嘌呤，属于细胞分裂素。

NAA：萘乙酸，属于植物激素生长素。

步骤（1）中，所述消毒的方法是：用浓度为60～90%的酒精浸泡外植体50～60s，然后用无菌水冲洗1～2次，然后再用浓度为0.05～0.15%的升汞溶液浸泡8～10min，最后用无菌水冲洗3～4次，即可。优选地，所述酒精的浓度为75%；所述升汞溶液的浓度是0.1%（w/v）。

酒精，即乙醇；升汞，即氯化汞。

步骤（1）中，所述温度为24～26℃，光照强度为1500lx，光照时间为10h/d。

步骤（1）所述培养基中，蔗糖的终浓度为30g/L，6-BA的终浓度为2.0mg/L，NAA的终浓度为0.1mg/L。

步骤（1）中，以叶柄作为外植体时，所述培养基中还添加有终浓度为0.3～1.0g/L复合添加剂，所述复合添加剂由如下重量百分比的成分组成：NH₄NO₃30％、P₂O₅28％、K₂O28％和FeSO₄14%。优选地，所述复合添加剂的终浓度为0.3g/L。

本发明用于半夏组织培养的培养基，它是MS培养基为基础培养基，添加有终浓度为30～50g/L的蔗糖、1.0～2.5mg/L的6-BA和0.1～0.2mg/L的NAA。优选地，所述培养基中，蔗糖的终浓度为30g/L，6-BA的终浓度为2.0mg/L，NAA的终浓度为0.1mg/L。

其中，所述培养基中还添加有终浓度为0.3～1.0g/L的复合添加剂，所述复合添加剂由如下重量百分比的成分组成：NH₄NO₃30％、P₂O₅28％、K₂O28％和FeSO₄14%。优选地，述培养基中，复合添加剂的终浓度为0.3g/L。

本发明半夏组织培养方法可以一步成苗，成苗率高，最高可以达到97%，培养得到的半夏苗健壮、长势好，培养时间短，培育成本低廉。本发明培养基可以有效促进半夏外植体的生长和分化，其中，外植体为叶柄时，本发明添加了复合添加剂的培养基可以很好地促进其生长分化，缩短培养时间，降低成本，应用前景良好。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1升汞处理不同时间对半夏外植体的影响结果图。

具体实施方式