[发明专利]一种多花黑麦草组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明属于植物生物学领域，具体涉及一种多花黑麦草组培快繁方法。

背景技术

多花黑麦草是重要的禾本科牧草,近年来,成为我国大力推广的牧草以及草坪草种类,在我国畜牧业发展和城乡美化中的作用越来越大。黑麦草分蘖多, 产量高, 质地柔软, 绿期长, 是良好的绿色饲料。另外, 其根系发达, 适生性强, 耐践踏, 有耐盐碱潜力, 能增加土壤有机质, 改善土壤结构, 防止水土流失, 是很好的草坪草。为适应黑麦草育种工作的需要, 保存和快速繁殖优质原始材料, 以及为有关黑麦草基因表达的生理生态研究适时提供可靠的研究材料，黑麦草的离体培养和快速繁殖技术受到越来越多的重视。目前有关黑麦草的组织培养仅限于种子诱导愈伤和植株再生，以及用原生质体、幼穗、茎尖等作外植体诱导愈伤组织或丛生芽的形成，但诱导时间长、增殖速度慢、成苗周期长，组培快繁技术还不成熟。

发明内容

本发明针对上述问题的不足，提供一种多花黑麦草组培快繁方法，其培养方法简便易行，培养周期短。

本发明为解决上述问题所采用的技术方案是：一种多花黑麦草组培快繁方法，包括无菌实生苗的制备、无根系无菌分蘖丛生芽的制备、有根系无菌实生苗的制备和移栽；

所述无根系无菌分蘖丛生芽的制备方法为：在超净工作台内，选取健壮的无菌实生苗，并将其置于无菌培养皿中，在无菌条件下先剪去无菌实生苗的根系，然后在根茎结合处向上1cm的位置切割，得到茎基，将得到的茎基放于组培瓶内的生芽培养基表面，然后轻压，使根部没入生芽培养基中，然后盖紧组培瓶盖子；再将组培瓶置于温度为23～27℃，光照时间为16h/d，光强为1500~2000Lx的光照培养箱中培养20~35天后，单个茎基萌发出高6~10cm，数量为8~20个的分蘖丛生芽，得分蘖丛生芽，然后从中选取数量为18~48个的分蘖丛生芽作为无根系无菌分蘖丛生芽；

所述有根系无菌实生苗的制备方法为：在超净工作台内，取出制得的无根系无菌分蘖丛生芽，并置于无菌培养皿中，用灭菌过的医用手术刀切除丛生芽上部的多余叶片，留下长2~3cm的丛生芽，然后在分蘖节处纵向切割，将其分割成完整的单芽，然后将单芽根部向下轻放于组培瓶内的生根培养基表面，轻压使其根部没入培养基中，接种完后盖紧瓶盖，将接种后的组培瓶置于温度为23～27℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500~2000Lx的光照培养箱中培养15~25天后，幼苗基部长出6~10根须根，得无菌实生苗。

所述无菌实生苗的制备方法为选取完整成熟的黑麦草种子，放入自来水中浸泡0.5~1h，然后在超净工作台内，将黑麦草种子转移至无菌瓶内，先用体积百分比分数为75%的酒精将黑麦草种子消毒30~60s，再用无菌水冲洗2~3遍，之后放入质量百分比浓度为0.1%的升汞中浸泡消毒6~8min，用无菌水冲洗4~6遍后，得到无菌种子，在超净工作台内，将得到的无菌种子放入无菌培养皿中，在无菌条件下轻放于无菌基本培养基表面，然后轻压，使种子没入培养基中，接种完后盖紧组培瓶盖子，将组培瓶置于温度为23～27℃，光照时间为16h/d，光照强度为1000~2000Lx的光照培养箱中，培养20~35天后，得到高度为5~8cm的无菌实生苗。

所述移栽的方法为将蛭石和草炭土按3:1的重量比混合，得混合基质，搅拌均匀后，备用；

从培养基中取出制备的的有根系的无菌实生苗，用清水洗掉根部残余的培养基，并置于混合基质中，使根系完全没入混合基质中，在温度为23～27℃，光照时间为16h/d，光照强度为1500~2000Lx的光照培养箱中培养7天后，再置于温度为23～27℃的玻璃温室中，在自然光照下培养6～7天后，即可成苗。

所述无菌基本培养基的配制方法，包括以下步骤：

步骤一：母液的配置：