[发明专利]多元阴离子交换基质

说明书

本发明公开了分离基质，其包含固定在支持物上的通过式R1‑L1‑N(R3)‑L2‑R定义的多种分离配位体，其中R1是五元或六元的取代或未取代的环结构或羟乙基或羟丙基基团；L1是亚甲基基团或共价键；R2是五元或六元的取代或未取代的环结构；L2是亚甲基基团或共价键；R3是甲基基团；和其中如果R1是羟乙基基团并且L1是共价键，R2就是取代的芳香环结构或取代或未取代的脂族环结构。

发明技术领域

本发明涉及具有新配位体的分离基质，其可被用于纯化生物分子，例如蛋白。本发明基质例如对于抗体的纯化是有用的。因此，本发明也包括层析基质用于分离的用途，用层析基质从其它化合物中分离抗体的方法和合成分离配位体的方法。

发明背景

单克隆抗体(MAb)的临床成功是生物制药产业中最令人激动的成就之一，这导致在某些情况下几吨(将批量生产的绝对规模的胰岛素和血浆蛋白相加)的年度生产需求。MAb是市场上在生长因子后面的目前第二大类型的生物技术药物，但到目前为止是增长最快的类型并被许多人相信是生物技术产业的未来。为满足此需求，生物培养容量使用高至25000 l的反应器而增加。此外，表达水平(目前在3-5g/l的范围内)被期望进一步增加，这将对纯化工具例如高通量介质和过程解决方案的开发提出另外的要求。在大规模纯化(下游处理)中的主要关注点与在实验室规模中典型的那些关注点不同；在大规模纯化中的重点是开发稳健和成本有效的方案，和减少单元操作的数量以改善总体过程经济性。抗体制备中当前的趋势表明使用A蛋白介质的亲和性层析是用于捕获抗体的最成本有效的备选方案。

在A蛋白捕获步骤后保留的常见污染物是抗体聚集体、渗漏的A蛋白、DNA和宿主细胞蛋白。这些和任何偶生的病毒颗粒必须在进一步的纯化步骤，例如一个或多个层析步骤中除去。阴离子交换、阳离子交换和疏水性相互作用层析步骤都被用于此目的，以流通模式或以结合-洗脱模式。最近以来，多元离子交换基质显示给出对这些污染物的有效清除。具体而言，描述于WO 2006/043896(A1)中的多元阴离子交换基质对于除去聚集体、宿主细胞蛋白和其它污染物是有用的，例如采用流通模式，其中污染物与基质结合和抗体在流通物中回收并任选回收在洗涤缓冲液中。带有配位体N-甲基、N-苄基乙醇胺的这类基质作为CaptoTM adhere和Capto ImpRes adhere (GE Healthcare，瑞典)是商售可得的。

由于MAb的大制备体积和与基于Mab的疗法相关的高成本，在Mab纯化中存在增加制备效率和通量的相当大的压力。也需要在用于治疗用途的Mab中降低免疫原性和另外潜在有害的残余污染物的量。这意味着在具体步骤中在清除污染物方面的任何改善都是有价值的，既因为它可降低制品中污染物的水平，也因为它也可使得具有较少步骤的纯化过程有可能，这将导致较大的成本降低。

因此，需要对新的多元阴离子交换配位体，所述多元阴离子交换配位体具有对污染物的改善的清除，所述污染物例如，抗体聚集体、宿主细胞蛋白、DNA、渗漏的A蛋白和来自抗体和类似蛋白(例如抗体片段、抗体融合蛋白等)的DNA。

本发明概述

本发明的一个方面在于提供新基质，其在将抗体从液体的其它组分中分离方面是有用的。这用如权利要求1中限定的基质实现。