[发明专利]快速方法生产高纯度癌干细胞和高纯度癌干细胞群

权利要求书

1.一种来源于人黑素瘤肿瘤的分离的细胞群，其中：

(i)所述群中至少30%的细胞表达CD146，且所述群中至少30%的细胞表达CD271，或

(ii)其中至少30%的细胞共表达CD146和CD271，其中百分比值(%)定义为相对于所述群的平均值。

2.权利要求1的分离的细胞群，其中：

表达为至少35%；和

共表达为至少35%。

3.权利要求1的分离的细胞群，其中：

表达为至少40%；和

共表达为至少40%。

4.权利要求1的分离的细胞群，其中：

表达为至少45%；和

共表达为至少45%。

5.权利要求1的分离的细胞群，其中：

表达为至少50%；和

共表达为至少50%。

6.权利要求1的分离的细胞群，其中低于5%的细胞是污染细胞。

7.权利要求1的分离的细胞群，其中低于2%的细胞是污染细胞。

8.一种包含自体树突细胞的疫苗，其中所述树突细胞加载了权利要求1的分离的细胞群，且其中所述树突细胞和人肿瘤来自同一人类受试者。

9.一种包含自体树突细胞的疫苗，其中所述树突细胞加载了权利要求5的分离的细胞群的至少一种，且其中所述树突细胞和人肿瘤来自同一人类受试者。

10.权利要求8的疫苗，其中在加载到树突细胞上之前，所述细胞群包含防止细胞分裂的辐射损伤，或包含防止细胞分裂的核酸交联剂。

11.一种来源于人黑素瘤肿瘤的分离的细胞群，其中所述群中至少30%的细胞表达CD146，至少30%的细胞表达CD271，或

其中至少30%的细胞共表达CD146和CD271，

其中所述细胞通过包括以下步骤的方法制备：

步骤i.将黑素瘤肿瘤样品中的细胞分散，

步骤ii.在低粘附表面或超低粘附表面上培养，

步骤iii.沉降以收集微球体；和

步骤iv.将细胞从微球体中分离。

12.权利要求11的细胞，所述方法还包括为了扩增细胞在培养基中在粘附表面上培养以产生扩增细胞群的步骤(步骤v)。

13.权利要求11的细胞，其中与在步骤i的细胞中是可检出的表达相比，所述分离的细胞群具有以下的至少一种：

(i)减量调节的免疫抑制分子；

(ii)增量调节的MHC-II；或

(iii)减量调节的免疫抑制分子和增量调节的MHC-II。

14.权利要求12的细胞，其中与在步骤i的细胞中是可检出的表达相比，所述分离的细胞群具有以下的至少一种：

(i)减量调节的免疫抑制分子；

(ii)增量调节的MHC-II；或

(iii)减量调节的免疫抑制分子和增量调节的MHC-II。

15.权利要求12的细胞，其中所述免疫抑制分子是吲哚胺-吡咯-2,3-双加氧酶、肿瘤生长因子-β和白介素-10(IL-10)的至少一种，且其中与在步骤i中是可检出的表达(定义为100%)相比，减量调节是至80%或更低的水平。

16.权利要求11的细胞，其中将细胞从黑素瘤肿瘤样品和微球体的一种或两种中分散包括用添加的蛋白酶处理。

17.权利要求11的细胞，其中在低粘附表面或超低粘附表面上的培养是在碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)存在下。

18.权利要求12的细胞，其中为了扩增细胞在粘附表面上的培养是在含有bFGF的培养基中。

19.权利要求11的细胞，其中在低粘附表面或超低粘附表面上的培养包括收集已经形成的任何肿瘤干细胞球体，其中所述收集每隔2-3天进行，将所收集的球体在新鲜培养基中在低粘附表面上恢复培养。

20.权利要求12的细胞，其中在粘附表面上培养的总时间选自为12-30天、14-28天或18-24天的期限。