[发明专利]靶向/免疫调节性融合蛋白及其制造方法

权利要求书

1.一种多核苷酸序列，其包含编码嵌合融合蛋白的核酸序列，所述嵌合融合蛋白包含：至少一个用于靶向癌细胞的靶向组成部分，以及至少一个抵消免疫耐受性的免疫调节组成部分，其中所述靶向组成部分和免疫调节组成部分通过具有足够氨基酸残基长度的氨基酸间隔物相连，使得两个组成部分能够成功地与它们各自的靶点结合。

2.权利要求1的多核苷酸序列，其中所述免疫调节组成部分特异性结合下列分子之一：(i)转化生长因子-β(TGF-β)，(ii)程序化死亡-1(PD-1)配体，(iii)4-1BB，(iv)胰岛素样生长因子1(IGF-1)，或(v)白介素-6(IL-6)。

3.权利要求1的多核苷酸序列，其中所述靶向组成部分是结合表皮生长因子受体(EGFR1、Erb-B 1)、HER2/neu(Erb-B2)、CD20、CTLA-4、粘蛋白1(MUC-1)、IGF-1、上皮细胞粘附分子(EpCAM)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)受体、PD-L1和41BB-L1、或其部分的抗体或其片段。

4.权利要求1的多核苷酸序列，其中编码至少一个靶向组成部分的核酸序列选自SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：25和SEQ ID NO：26。

5.权利要求1的多核苷酸序列，其中编码至少一个免疫调节组成部分的核酸序列选自SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28。

6.权利要求1的多核苷酸序列，其中所述靶向组成部分包含抗体的重链和轻链，所述抗体结合选自EGFR1、HER2/neu、CD20、CTLA-4、白介素-6(IL-6)、粘蛋白l(MUC-1)、胰岛素样生长因子1(IGF-1)、上皮细胞粘附分子(EpCAM)和白介素-2(IL-2)的成员。

7.权利要求6的多核苷酸序列，其中所述免疫调节组成部分被融合到所述轻链和/或重链，并且是选自TGF ECD、程序化细胞死亡-1(PD-1)受体ECD、CTLA-4受体ECD、4-1BB配体的成员。

8.权利要求1的多核苷酸序列，其中所述免疫调节组成部分包括转化生长因子-β受体TGF-βRII、TGF-βRIIb或TGF-βRIII的细胞外配体结合结构域。

9.一种优化的基因，其编码包含至少一个靶向组成部分和至少一个免疫调节组成部分的融合多肽，以用于在人类对象中治疗癌症，其中所述优化的基因已被修饰以增加在人类对象中的表达，并选自SEQ ID NO：12至28。

10.一种载体，其包含权利要求9的优化的基因，其中所述优化的基因已被修饰以增加CG序列。

11.一种在对象中治疗癌症的方法，所述方法包括：

提供至少一种重组载体，其包含编码至少一个靶向组成部分和至少一个免疫调节组成部分并选自SEQ ID NO：12至28的核苷酸序列，以及

在使所述核苷酸序列的表达水平在所述对象中产生治疗有效量的被编码的融合蛋白的条件下，将所述重组载体给药于所述对象。

12.一种表达载体，其包含优化的基因的多核苷酸，所述优化的基因编码至少一个靶向组成部分和至少一个免疫调节组成部分，并选自SEQ ID NO：12至28。

13.一种重组宿主细胞，其用权利要求12的表达载体转染。

14.一种制备本发明的融合蛋白的方法，所述方法包括：

用编码嵌合融合蛋白的多核苷酸序列转染宿主细胞以产生转化的宿主细胞，其中所述多核苷酸序列编码至少一个靶向组成部分和至少一个免疫调节组成部分，并选自SEQ ID NO：12至28；以及

将所述转化的宿主细胞维持在足以使所述肽表达的生物条件下。