[发明专利]产生生物样品的图像的方法

权利要求书

1.在生物样品中产生目标区的图像的方法，包括以下步骤：

1） 产生包括已经经过第一方案而非第二方案的所述生物样品的所述目标区的第一图像；和

2） 产生包括已经经过第二方案后的所述生物样品的所述目标区的第二图像；

其中所述目标区小于所述样品。

2.权利要求1的方法，其中通过将所述生物样品的第一图像与预定标准比较而选择所述目标区。

3.前述权利要求中任一项的方法，其中第一方案包括靶蛋白的免疫荧光检测。

4.权利要求3的方法，其中所述免疫荧光检测包括抗体与所述靶蛋白的物理结合。

5.权利要求4的方法，其中所述抗体用荧光团标记。

6.权利要求3-5中任一项的方法，其中所述靶蛋白选自细胞角蛋白、细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白B1、Ki67、ER、AR、PI3K、cMET、EGFR、cMyc、PTEN、MAPK、EGFR和HER2。

7.权利要求3-6中任一项的方法，其中第一方案进一步包括提供形态学信息的至少一种额外的蛋白的免疫荧光检测。

8.权利要求7的方法，其中所述至少一种额外的蛋白包括角蛋白15、19、E-钙黏蛋白、Na+K+ATP酶、Claudin 1、胶原IV、EPCAM、纤连蛋白、glut 1、SMA、波形蛋白、平滑肌肌动蛋白、CD31和全-细胞角蛋白。

9.权利要求7-8中任一项的方法，其中所述形态学信息包括组织来源、细胞来源、肿瘤、正常区和基质区、细胞类型和亚细胞结构例如细胞膜、细胞质、细胞核。

10.权利要求7-9中任一项的方法，其中所述形态学信息包括上皮起源的细胞的细胞质位置的有关信息。

11.前述权利要求中任一项的方法，其中第二方案包括免疫荧光检测靶蛋白，或通过将探针与靶核酸序列杂交，荧光检测至少一种靶核酸序列。

12.权利要求11的方法，其中所述杂交反应选自FISH、IQ-FISH、原位PCR、滚环扩增和引物原位标记。

13.权利要求11-12中任一项的方法，其中所述杂交反应是FISH，和所述反应进一步包括识别目标核酸序列所在的染色体的每一条的探针。

14.权利要求11-13中任一项的方法，其中所述探针包括核酸探针、肽核酸探针、锁核酸(LNA)探针、mRNA探针、miRNA探针或siRNA探针。

15.权利要求11-14中任一项的方法，其中所述探针被荧光标记。

16.权利要求11-15中任一项的方法，其中所述靶核酸序列包括以下的核酸序列：EGFR、TOP2A、cMyc、ALK、FGFR1和HER2。

17.前述权利要求中任一项的方法，其中第一或第二方案包括所述样品用提供形态学信息的荧光标记来染色。

18.权利要求17的方法，其中所述荧光标记包括4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)、伊红、Hoechst 33258和Hoechst 33342 (两种双苯酰亚胺)、碘化丙啶、奎纳克林、荧光素-鬼笔环肽、色霉素A 3、吖啶黄-福尔根反应、金胺O-福尔根反应和溴化乙锭。

19.权利要求17-18中任一项的方法，其中所述荧光标记使细胞核染色。

20.前述权利要求中任一项的方法，其中第一或第二方案包括检测所述生物样品的自发荧光。

21.前述权利要求中任一项的方法，其中第一和第二图像是荧光图像。

22.权利要求21的方法，其中产生第一图像和/或产生第二图像包括产生明场型图像，其类似于明场染色。

23.权利要求22的方法，其中所述明场型图像类似于模拟的H&E图像。

24.权利要求22的方法，其中所述明场型图像类似于模拟的DAB图像。

25.前述权利要求中任一项的方法，进一步包括产生合成图像，其包括来自第一和第二图像的每一个的至少目标区。