[发明专利]LPS疫苗

说明书

技术领域

本发明提供可用于预防由革兰氏阴性菌例如沙门氏菌和大肠杆菌(E. coli)引起的传染性疾病的新的疫苗。特别地，本发明涉及使用作为保护性抗原的源自革兰氏阴性菌的含O-抗原(例如脂多糖)的结构免疫非人动物，特别是禽类的方法。

背景技术

细菌在用革兰氏染色法进行测试的时候具有不同的染料亲和性，这取决于细胞壁的不同组成，且细菌基于它们染料亲和力的差异被分为两种主要的群体，革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌。在革兰氏阴性菌的情况下，细胞壁由外膜和外膜内侧的肽聚糖层组成。外膜由磷脂，脂多糖(LPS)，脂蛋白和膜蛋白组成。外膜的单位膜结构由磷脂和脂多糖组成。发现脂多糖在膜的外层，而磷脂在其内层。脂多糖由高分子量的脂质，称为脂质A，和与其结合的多糖组成。脂质A构成外膜的外层，而脂多糖从外膜向外延伸。外部部分和邻近脂质A部分的糖的种类互不相同。外部部分被称为O-侧链多糖(O-抗原)，而内部部分被称为核心多糖。由O-抗原组成的糖主要是己糖和戊糖，并且由3-5种这些多糖组成的基本结构重复出现。在核心多糖中，除了这些糖外，还存在对于各个细菌来说独特的糖如辛糖，例如酮脱氧辛酸，和庚糖。脂质A是对各个细菌来说独特的脂质，其包含糖，即两分子的葡萄糖胺，其相互以β-1,6-结合，和与所述糖结合的磷酸和脂肪酸。脂质A与核心多糖在糖的6'-位置结合。

存在许多种革兰氏阴性菌。沙门氏菌属(Salmonella)和埃希氏菌属(Escherichia)，属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，以及嗜血杆菌属(Haemophilus), 属于巴氏杆菌科(Pasteurellaceae)也都包括在革兰氏阴性菌中。

沙门氏菌属，具有周身鞭毛的第二大杆菌，根据O-抗原的类型被分为多组，且进一步根据H-抗原的类型进行细分，导致超过2000种血清型。沙门氏菌的宿主范围非常广泛，已知多种哺乳动物包括人和禽类被沙门氏菌感染或携带沙门氏菌。当鸡被感染时，沙门氏菌可以在小鸡中引起败血症。然而，在成年鸡中，鸡携带者因无症状而避免被捕杀，且其结果是源自于被沙门氏菌污染的鸡的鸡肉和鸡蛋被发售，通过由此制造的食品而导致人食物中毒。

沙门氏菌引起的食物中毒在摄入被污染食物之后的12-48小时的潜伏期之后发生。潜伏期依赖于细菌的摄入量，患者的状况和年龄可能不同。症状主要是急性肠胃炎，且主要症状是，腹泻，腹部疼痛，呕吐和发热。因此，鸡的沙门氏菌疫苗不仅仅是预防鸡发生疾病，而且还是用于公共卫生的重要疫苗。

在传统的针对沙门氏菌的疫苗中，是包含灭活沙门氏菌细胞的全细胞疫苗。然而，全细胞疫苗可能引起副作用，这是因为它包含不具有抗原性的部分。在成群饲养的鸡中，考虑到疫苗接种的人力节约，强烈需要可以通过单次注射预防多种疾病的多价疫苗。而且，多价疫苗可以有助于减少鸡的压力，因为它减少了注射的次数。但是，虽然多价疫苗具有这样的便利性，它容易在注射部位引起接种反应，特别是当它包含细菌如沙门氏菌时。

在这种情况下，已进行了针对沙门氏菌的组分疫苗的研究，其中研究了脂多糖(O-抗原)的应用。例如，有报道由源自鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)的O-抗原与载体蛋白结合的缀合物施用给小鼠，以证实其效力(非专利参考文献1)。还有报道源自伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhi)的脂多糖施用给小鼠以证实其效力(专利参考文献1)。除沙门氏菌外，有报道源自泰国伯克氏菌(Burkholderia thailandensis)或类鼻疽伯克氏菌(Burkholderia pseudomallei)的脂多糖施用给小鼠以证实其效力(专利参考文献2，非专利参考文献2)。

但是，在用于活体的药物中脂多糖的污染被谨慎地避免，因为脂多糖在临床上可能引起多种高致死的疾病，例如败血性休克，弥散性血管内凝血(DIC)和多器官衰竭(MOF)，而且甚至是在痕量的情况下也可能成为发热的病因(非专利参考文献3)。在实践中，据报道在施用脂多糖之后72小时内，超过90%的小鼠死亡(专利参考文献3)。在这种情况下，通常不会提出使用脂多糖本身作为疫苗抗原的想法。

专利参考文献

专利参考文献1: WO2004/052394

专利参考文献2: WO2010/082020

专利参考文献3: 日本专利公开号2001-26602

非专利参考文献