[发明专利]包含来自植物包膜病毒的基质蛋白的病毒样颗粒及其用途

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2012年3月22日提交的美国临时申请No.61/614,141的利益，为了所有目的将所述临时申请的内容通过引用整体并入本文。

发明领域

本发明总地来说涉及优选在植物中产生的包膜病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)以及用于产生和使用该VLP的方法。

发明背景

病毒样颗粒(VLP)是通过自组装病毒蛋白形成的无病毒基因组存在的复合结构。VLP平台日益用于增强靶特异性免疫原性。可在几个表达系统，包括植物中产生VLP。在植物中产生VLP提供了额外有利方面，包括安全性和时间效率。然而，在植物中形成VLP是生理过程的部分并且导致不同尺寸和形状的颗粒形成，这使得商业生产和平滑调控路径极具挑战性。野生型流感病毒颗粒的尺寸取决于株系，并且在70与270nm之间变化(Nayak等人,2009,Virus Res143(2):147-161)。植物产生的流感病毒颗粒(VLP)具有不同形状和宽广的尺寸范围。例如，已报导包膜多形性流感VLP尺寸为100至150nm。(Vezina等人,2011,BioPharm International Supplements 24(5):s27-s30)。因此，仍然存在对适合疫苗开发的更均一的VLP的需要。

发明概述

本发明的公开的主题涉及具有来源于包膜病毒的基质蛋白和表面多肽的新型病毒样颗粒(VLP)及其用途。这些VLP是包膜的，并且尺寸大体均一。

根据本发明的一个方面，提供了病毒样颗粒(VLP)。VLP包含来源于第一植物包膜病毒的基质蛋白和表面多肽。表面多肽包含来源于靶多肽的暴露于表面的部分、跨膜结构域和胞质尾。胞质尾来源于第二植物包膜病毒的跨膜蛋白(例如糖蛋白)。VLP可在植物细胞、植物或植物的部分中产生。

所述第一和第二植物包膜病毒可相同或不同，优选相同。其中任一植物包膜病毒可以是植物弹状病毒或非弹状病毒。优选地，第一植物包膜病毒是植物弹状病毒。植物弹状病毒可选自莴苣坏死黄化病毒(Lettuce Necrotic Yellows virus,LNYV)、北方谷物花叶病毒(Northern Cereal Mosaic virus,NCMV)、苦苣菜病毒(Sonhus Virus,SonV)和花椰菜坏死性黄化病毒(Broccoli necrotic yellows virus,BNYV)。优选植物弹状病毒是莴苣坏死黄化病毒(LNYV)。

表面多肽的暴露于表达的部分可以是抗原性多肽，例如疫苗组分，或可以是治疗剂。治疗剂可以是治疗性多肽。

靶多肽可来源于病原体。病原体可选自病毒、细菌、寄生虫和真菌。病毒可以是动物病毒。动物病毒可选自流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、人免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)、人乳头瘤病毒(HPV)、埃博拉病毒、黄热病毒、轮状病毒和水疱性口炎病毒(VSV)。

靶多肽可以是天然表面多肽。天然表面多肽可以是流感病毒的血凝素。

靶多肽可以是人工表面多肽。人工表面多肽可以是来自炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)的保护性抗原83(PA83)、来自恶性疟原虫的Pfs25或其它可溶性蛋白或肽。

流感病毒可选自甲型流感病毒和乙型流感病毒。流感病毒可选自甲型流感病毒印度尼西亚05/05株、甲型流感病毒加利福尼亚/04/2009(H1N1)株、甲型流感病毒/维多利亚/3/75(H3N2)株和乙型流感病毒香港/330/2001。

靶多肽可以是治疗剂。治疗剂可以是治疗性多肽。

跨膜结构域对于所述表面多肽的暴露于表面的部分可以是天然的或外来的。跨膜结构域可来源于细胞或病毒跨膜蛋白。病毒跨膜结构域可来源于胞质尾所源自的跨膜蛋白。